啤酒花多酚提取分离工艺优化及其抑菌活性研究

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啤酒花是重要的酿酒原料及药食同源植物,多酚含量丰富,酒花多酚是一种植物多酚,植物多酚具有很强的抗肿瘤、抗氧化、抗菌、消除体内自由基等功能。酒花多酚多用作食品添加剂以防止食物腐败,使酒花多酚具有很大的开发利用前景,提高了啤酒花产品的利用。本实验以玉门饮马农场的马可波罗为酒花原料,通过单因素试验和正交试验确定了酒花多酚的最佳提取工艺;通过大孔吸附树脂对酒花多酚进行分离工艺研究,并采用HPLC对主要成分进行了初步分析,在此基础上对酒花多酚进行了理化性质、抑菌活性的研究。主要结果如下:1.本试验采用了有机溶剂回流法、微波辅助处理-水浴回流法这两种工艺从压缩片状酒花中提取酒花多酚。有机溶剂回流法的最佳提取工艺是乙醇浓度55%,浸提时间3.5h,料液比1:22,浸提温度为78℃,在此条件下多酚的提取率为2.387%;微波辅助处理-水浴回流提取法的最佳工艺为微波功率213W,微波时间3.5min,乙醇浓度63%,料液比1:15,水浴温度92℃,水浴时间25min,酒花多酚的提取率为5.730 %。两种工艺比较,微波辅助处理-水浴回流法的酒花多酚提取率高,是有机溶剂回流法的2.4倍,并具有耗时短、能耗低的优点,因而更适合啤酒花多酚的提取。2.以6种型号的大孔吸附树脂为填充料进行啤酒花多酚的分离纯化试验。其中通过静态试验确定出X-5型树脂最适于啤酒花多酚分离,动态吸附试验得出的最佳吸附条件为:0.6mg/mL料液浓度、上样流速1.5mL/min,最佳解吸条件为60%乙醇水溶液洗脱液以0.75 mL/min流速对X-5型树脂洗脱;并研究了X-5型树脂对啤酒花多酚静态吸附热力学过程,结果表明在温度298~308K和浓度0.2~1.2mg/mL的范围内,X-5型树脂对啤酒花多酚吸附的平衡数据符合Freundlich等温吸附方程,且为优惠吸附。对啤酒花多酚在X-5型树脂上的吸附焓、吉布斯自由能和吸附熵进行计算表明,该吸附过程是一个放热过程,且是自发的不可逆过程。3.在采用HPLC外标法对酒花多酚精提物的初步结构分析中,通过以芦丁、槲皮素、山奈酚、表儿茶素、儿茶素和没食子酸的混标图谱和标准曲线,得出所分离纯化的酒花多酚精提液中主要含有芦丁、儿茶素和槲皮素这三类酚类物质,其含量分别为1.438mg/mL、0.032 mg/mL、0.012 mg/mL。4.对酒花多酚的溶解性、折光率、特征显色反应这些理化性质进行研究,结果表明酒花多酚在中极性有机溶剂中的溶解性比非极性溶剂和极性溶剂好,并且在6种常见有机溶剂中的折光率大小为:乙醇>丙酮>甲醇>水>乙酸乙酯>乙醚=氯仿;酒花多酚的特征显色反应,可以初步推断酒花多酚具有酚类物质的共性;采用HPLC外标法测定出的成分芦丁、槲皮素和儿茶素这三种物质中具有六羟基联苯酚类活性基团,因而与Folin酚试剂、三氯化铁反应也可呈现出蓝紫色和绿色,说明它们具有酚羟基活性集团物质。5.酒花多酚对常见导致食品腐败变质的微生物的抑制效果表明,在供试的酒花多酚浓度4mg/mL~1mg/mL范围内,对酿酒酵母、根霉、毛霉、青霉、黑曲霉这五种真菌没有抑菌效果,不产生抑菌圈;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌这3种细菌有抑菌效果,产生明显的抑菌圈。试验中采用滤纸片法、牛津杯法、打孔器法三种方法研究酒花多酚对细菌的抑菌效果,试验表明,打孔器法操作简便,易于控制,抑菌效果较好;金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏杆菌在0.2~4mg/mL浓度的酒花多酚溶液中最低抑菌浓度(MIC)分别为:0.8mg/ mL、0.8mg/mL、1.2 mg/ mL。
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