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蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,约有一半以上的蛋白质是发生糖基化的,在许多生物过程中蛋白质糖基化起着重要的作用。糖基化的形成由细胞内的糖基转移酶和其他转运蛋白共同负责,这些转运蛋白或酶的变化(敲除或高表达)会对细胞表面的整体糖基化产生影响。目前在不同物种中已发现了众多数量与细胞表面糖基化相关的基因,尤其是在一些模式生物中,如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。但这些相关基因的发现都是通过长期零散的研究所得到的,由于缺乏相应的技术手段,迄今为止仍难于进行全局性基因的发现研究,因此在模式生物如酿酒酵母中还可能有相当数量的糖基化相关基因有待发现。 本研究通过对两套酵母库中153个与糖基化相关的克隆进行芯片分析,建立了一套基于凝集素芯片酵母表面糖谱分析技术。结果证明表明我们所设计的实验方案可行,并通过菌落 PCR及质谱进一步确认芯片结果的可靠性。基于初筛结果,对BY4742库中5263个单基因敲除菌株进行了筛选,后期数据分析仍在进行中。通过对整体芯片结合信号弱的菌株重新进行芯片验证,初步结果显示 VAN和YLR358C两敲除菌在NPL、VGA、ASA这三个凝集素的信号比野生菌株 BY4742低很多,而 VAN是编码一已知的糖聚合酶亚基, YLR358C功能未知,很可能为备选糖基化相关的新基因。同时,通过构建两个内质网中的糖基转移酶基因ALG5和ALG8的双敲除菌株进行芯片实验,发现了4个双敲除致死基因:YFL032W, PER1,NOP12,HAC1。这4个很可能是与糖基化有关的备选新基因。综上所述,本研究基于凝集素芯片技术,建立了一套快速高通量的活酵母细胞表面糖谱分析技术。通过对BY4742敲除库菌株的筛选,初步发现了5个新的有可能与糖基化相关的基因。虽然数据分析工作还未完成,但有理由相信会有更多的新发现。