论文部分内容阅读
间质蛋白层是疱疹病毒核衣壳和外膜之间的特殊结构。疱疹病毒核衣壳首先在细胞核内组装完成。在核衣壳从细胞核到细胞外释放过程中可以获得多种类型的间质蛋白质。目前关于疱疹病毒在细胞核内可以获得的间质蛋白类型以及这些间质蛋白是否参与病毒颗粒的核释放过程及其分子机制都还有许多不清楚的地方。在γ疱疹病毒家族中，由于致瘤性的人属γ疱疹病毒Epstein-Barr病毒(EBV)和卡波西肉瘤相关病毒(KSHV)在体外缺少复制效率高的细胞系，这类研究相应更少。鼠疱疹病毒68(MHV-68)与KSHV和EBV高度同源，且在体外可以高效感染多种类型的细胞系，已经成为研究γ疱疹病毒裂解期复制的有效模型。我们之前发现MHV-68间质蛋白ORF33（ORF33）对疱疹病毒形态学发生过程起关键作用。但是关于ORF33结合病毒颗粒以及影响病毒颗粒释放的分子机制还不清楚。在这里我们首先综合利用免疫荧光，病毒分离以及免疫电镜等方法证明间质蛋白ORF33在病毒发生初级囊膜化之前就可以结合核衣壳并且在病毒形态发生过程中一直保持与病毒颗粒的结合。ORF33定位在核衣壳组装的位置并与衣壳蛋白具有相互作用表明ORF33很有可能是通过与衣壳蛋白相互作用直接结合核衣壳的。我们进一步发现ORF33可以分别同定位在内核膜处的核释放复合体ORF67/ORF69以及另外一个间质蛋白ORF45具有相互作用。核释放复合体ORF67/ORF69在疱疹病毒出核膜过程中发挥关键作用。单独表达该复合体在细胞中就可以引起病毒样大小的小泡在核膜处生成。我们发现ORF33可以提高小泡形成的效率。根据以上数据以及我们之前发现的ORF33在病毒核释放中的重要作用，我们认为ORF33可以作为一个桥梁在内核膜处连接核衣壳与核释放复合体，从而促进初级囊膜化的进行。间质蛋白ORF45是γ疱疹病毒特有的。我们发现ORF45是在细胞质内病毒发生间质化的位置结合到病毒颗粒上的。根据ORF33与ORF45结合病毒颗粒的顺序以及我们之前发现的ORF45依赖ORF33结合病毒颗粒的实验现象，我们认为ORF33与ORF45的相互作用可以帮助病毒颗粒在细胞质处获得ORF45。