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研究背景及目的: 婴幼儿肺炎是我国儿童死亡的主要原因之一。临床上可累及多个器官和系统,其中,心血管系统常常受累,心肌尤其是最易受损的组织之一。心功能障碍可严重影响肺炎,尤其是重症肺炎的预后。有资料显示,缺氧、感染累及心肌、全身代谢紊乱以及包括氧自由基、内皮素等在内的一系列体液因子的紊乱均可导致肺炎合并心力衰竭,但是,在细胞水平上尚乏充足的实验研究予以阐释。由于钙离子是细胞信号传导中重要的第二信使,又是心肌细胞收缩和舒张过程的重要调节因子,故本研究希望通过研究肺炎对心肌细胞钙代谢的重要环节的影响,包括细胞膜L型钙通道电流和细胞浆中钙离子浓度的动态变化,从细胞水平上探讨肺炎合并心力衰竭的可能发生机制,此即本实验研究的目的。研究方法: 实验动物选用50日龄清洁级Wister大鼠。首先采用气管内接种金黄色葡萄球菌的方法,建立肺炎幼鼠模型。单个右室心肌细胞的获取通过在简易Langendoff装置上对离体心脏进行主动脉逆行灌注,其后采用链酶蛋白酶E于37℃、pH7.3-7.4、通氧等实验条件下酶解而实现。在此技术基础上,设立不同时间的肺炎组,并设相应的对照组,进行细胞膜L型钙通道电流及细胞内Ca2+浓度的测定: 1.分接种后24小时的肺炎组(肺炎1组)、接种后120小时的肺炎组(肺炎2组),以及经气管内注入等量无菌生理盐水后24、120小时的对照组(对照1组和对照2组)。采用全细胞式膜片钳,邯叮己录L型钙通道电流(I。。。),观察并比 巾炎组与对照组的电流峰值、最大电流电位(即峰电位)和激活电位。 2.+后24小时的月*炎组、撕初青72小时的月向炎组,以及不作任何处理的空白对照组,共3组。用激光共聚焦显微镜(ACA 570)和特异性荧光探针门u。-3-州,分别观察不同病程的肺炎对吧棚钢胞内Q广浓度的影响。结果: 1.肺炎对右氢心肌细胞膜I。;.的影响 四个组的峰电位均为omV,激活电位均为一30mV.肺炎1组(654.4131.6)和对照 1组(M4.6士36.7)的电流峰值相比无显著性差异(P=0 410),肺炎2组(955.6士11.9)较对照2组(历1.0士73.4)则明显增加(P<0.001)。 2.肺炎对右室心肌细胞内时鹏的影响 静息状态下,24 ’h时肺炎组七棚细胞内CazW&无显著改变(P==0.059),而72小时肺炎组则显著增高(P<0.001);加入肌 后2.5、5分钟,24小时肺炎组O肌细胞内e’*增加比率显著低于对照组(分别为K0.001和P<().05),7.5、10分钟时,两者无显著性差异(P>0.05)。而72 ,J’时肺炎组的【Ca’*增加比率在前10分钟内均低于对照组(均为P(0.001)。g.st沦: 门)肺炎早期幼鼠右室,c见m咽胞膜卜型乙门甩遣电流无明显改变,中后期明显增大。 叹)在幼刷*炎的观察期内,右室。O肌细哦L型时相瞳电流的辫属性,包括电流峰电位和激活电位,未发生明显改变。 Q)E市炎6佑室Clw,*jx,’’lw,*jx,’’胞发生钙超载:肺炎早期已出现钙动员g肋的下降,随病程发展加重。