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研究背景幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）是人体内最常见的病原微生物之一,全世界50%以上的人口感染该菌。现已明确H.pylori与慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤（gastric mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma,MALToma）和胃腺癌等疾病的发生密切相关。在Correa提出的经典的H.pylori感染与肠型胃癌发生模式“慢性活动性胃炎-慢性萎缩性胃炎-肠化生-异型增生-胃癌”中,H.pylori引起的慢性活动性胃炎是胃癌发生的最主要病因,也是胃癌发生的启动因素,但是H.pylori如何导致慢性胃炎的机制尚不清楚。H.pylori分泌的毒力因子空泡细胞毒素（vacuolating cytotoxin A,Vac A）参与多种致宿主损伤的病理及免疫过程。例如Vac A可在胃上皮细胞膜上形成选择性的离子通道,促进HCO3-释放,从而降低胃酸的分泌;同时Vac A也可以与肥大细胞结合,促进其炎性细胞因子的释放等。NLRP3炎性小体是一种与感染免疫密切相关的多蛋白寡聚体,其激活可以引起白介素-1β（interleukin 1 belta,IL-1β）的成熟释放,引起强烈的炎症反应。本研究拟证实H.pylori重要毒力因子Vac A是否通过激活NLRP3炎性小体参与慢性胃炎的致病过程,研究结果将有助于阐释H.pylori的致病机制,为临床防治提供新的靶点。研究目的明确H.pylori Vac A是否激活NLRP3炎性小体通路,为阐明H.pylori引发慢性感染的致病机理及其防治提供初步的理论依据。研究方法1、体内实验:收集慢性胃炎患者胃组织样本,采用q RT-PCR技术检测NLRP3、Caspase-1和pro-IL-1β的m RNA表达;Western blotting技术检测NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白表达;ELISA技术检测IL-1β蛋白表达。2、体外实验:WT H.pylori 26695或△Vac A H.pylori 26695与AGS细胞共孵育,采用q RT-PCR技术检测NLRP3、pro-IL-1β和Caspase-1 m RNA的表达;Western blotting技术检测NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达;ELISA检测IL-1β蛋白表达。3、体外阻断实验:si RNA-NLRP3转染AGS细胞后,分别用PBS、WT H.pylori26695和△Vac A H.pylori 26695与转染后AGS细胞共孵育,采用q RT-PCR检测pro-IL-1β的m RNA表达,ELISA检测IL-1β蛋白表达。4、体内阻断实验:H.pylori菌液灌胃,构建C57BL/6小鼠慢性胃炎模型,腹腔注射DMSO或者DMSO+Mcc950,通过HE染色观察胃粘膜病理,q RT-PCR检测pro-IL-1β的m RNA表达,ELISA检测胃组织IL-1β蛋白表达。研究结果1.体内实验显示:H.pylori显著影响NLRP3炎性小体相关分子的表达（1）与H.pylori阴性患者相比,H.pylori阳性患者中胃粘膜NLRP3、Pro-IL-1β和Caspase-1的m RNA表达水平显著增加,且Vac A s1m1型患者比Vac A s1m2型患者上述分子表达的增加更为明显（p<0.05）;（2）与H.pylori阴性患者相比,Vac A s1m1和Vac A s1m2患者IL-1β的分泌均增加（p<0.01）;（3）与H.pylori阴性患者相比,H.pylori阳性患者中NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白的表达明显增加（p<0.05）。2.体外实验显示:H.pylori影响NLRP3炎性小体相关分子在AGS细胞中的表达（1）与对照组相比,WT H.pylori 26695组NLRP3、Caspase-1和pro-IL-1β的m RNA表达水平明显增加（p<0.05）;（2）与对照组相比,WT H.pylori 26695组IL-1β的分泌增加（p<0.001）;（3）与对照组相比,WT H.pylori 26695组NLRP3、Caspase-1和IL-1β的蛋白表达水平增加（p<0.05）。3.阻断实验研究发现H.pylori Vac A依赖NLRP3蛋白的表达促进IL-1β的成熟分泌（1）si RNA-NLRP3转染AGS细胞后,NLRP3蛋白表达降低;（2）H.pylori与si RNA-NLRP3转染的AGS细胞共孵后,与对照组相比,WT H.pylori26695组IL-1β的分泌显著降低（p<0.01）。4.H.pylori感染的慢性胃炎小鼠动物模型中,与对照组相比,Mcc950组中在WT H.pylori 26695和△Vac A H.pylori 26695灌胃后,pro-IL-1β的m RNA水平和IL-1β蛋白水平表达均明显下调（P<0.01）。结论:H.pylori Vac A能够激活胃上皮细胞NLRP3炎性小体,促进IL-1β的成熟分泌,引起胃上皮细胞的慢性炎症。