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本研究拟进行sTNFR1的基因克隆,进一步观察sTNFR1基因及其产物治疗肝功能衰竭的效果,为临床上治疗肝功能衰竭提供新的线索。
本研究采用RT-PCR成功地扩增出sTNFR1全编码区基因片段,并将其克隆于原核表达质粒pMAL-c2x,构建了原核表达重组质粒的基因工程菌pMAL-c2x-sTNFR1/JM109,成功表达了融合蛋白sTNFR1-MBP,并经Westernblot鉴定;经淀粉树脂亲和层析法纯化法得到了纯化的融合蛋白sTNFR1-MBP;将稳定转染细胞株(PSR/NIH3T3)治疗GalN/LPS所致的小鼠急性肝衰竭,提高小鼠存活率(70﹪,14/20),能减轻肝脏病变程度,降低血清中转氨酶及IL-1,IL-6等细胞因子的水平,减低肝细胞的凋亡率。
结论为TNFα对瞬时转染pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701细胞株细胞毒性作用受到抑制,凋亡率较对照组降低;稳定转染细胞株(PSR/NIH3T3)能分泌sTNFR1,中和TNFα,抑制了炎症介质的释放和凋亡的发生。从而减轻D-GalN/LPS所致的小鼠肝损伤,提高治疗组的存活率。