基于海藻酸钠—银纳米粒分析探针比色法检测尿酸的研究报告

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目的尿酸(Uric Acid,UA)是人体内嘌呤的代谢产物。人体中尿酸与多种疾病(高尿酸血症、痛风、肾病以及心血管疾病等)有关。因此,检测人体中的尿酸浓度对于疾病的预防和治疗非常重要。基于此,本文建立了一种简便、快速、准确的比率型比色法,测定尿液中尿酸的浓度。方法在0.05%(w/v)海藻酸钠(Sodium alginate,SA)溶液中加入硝酸银溶液避光搅拌5 min,再加入新鲜配制的硼氢化钠溶液,避光搅拌20 min即可得到海藻酸钠-银纳米粒子(SA-Ag NPs)。对制备的SA-Ag NPs进行一系列考察。(1)通过紫外可见吸收光谱(UV-vis)测定银纳米粒子的吸收曲线,同行比较单纯的Ag NPs和SA-Ag NPs的光谱特征,考察其在不同p H、温度条件下的稳定性。(2)优化制备条件,如p H、SA浓度以及还原剂Na BH4的浓度。(3)采用透射电子显微镜(Transmission electron microscopy,TEM)、高分辨透射电子显微镜(High-resolution transmission electron microscopy,HRTEM)、动态光散射(Dynamic light scattering,DLS)、X-射线能量散射谱(X-ray energy dispersive spectroscopy,EDS)、傅里叶变换红外光谱(Fourier Transform Infrared spectroscopy,FTIR)、原子力显微镜(Atomic Force Microscope,AFM)、X射线衍射(X-ray Diffraction,XRD)表征制备的SA-Ag NPs的形貌特征和化学构成。(4)探讨SA-Ag NPs的合成机理。(5)优化分析测试条件,如反应时间、温度以及p H;(6)探讨SA-Ag NPs检测尿酸的原理;(7)在最优制备与检测条件下,建立尿酸检测的标准曲线,同时考察一些常见的干扰物质对尿酸检测的影响;(8)采集两名实验人员的尿样,用建立的比色法完成尿液样本的检测,并进行回收率试验。结果我们成功制备了SA-Ag NPs复合纳米粒子。(1)SA-Ag NPs的最优制备条件是:p H=8.5,SA浓度为0.05%,Na BH4的浓度为1 m M。UV-vis测试结果表明SA-Ag NPs在400 nm处有特征性等离子体吸收峰,溶液为黄色。(2)TEM、HRTEM、DLS、EDS、FTIR、AFM及XRD测试表明制备的SA-Ag NPs为粒径分布均匀的球形结构,具有良好的分散性和稳定性,能特异性地与尿酸作用,导致吸光强度发生改变。(3)初步探讨了SA分子与Ag NPs的作用机制:海藻酸钠通过羟基和羧基与银纳米粒的空键轨道进行配位,从而包裹在Ag NPs核表面,形成保护层。(4)SA-Ag NPs在p H(2.5-12.5)以及0~70℃下稳定性良好。在4℃避光环境下储存一个月后,400 nm处的吸光度仍能保持初始值的94.4%。(5)尿酸与SA-Ag NPs的最优反应时间为50 min,温度为50℃,最佳p H=8.5。(6)TEM、AFM、FTIR、DLS等表征手段揭示了尿酸与SA-Ag NPs的反应机制:UA作用于SA-Ag NPs复合物中SA的保护层,暴露出Ag NPs的结合位点,然后UA中的N/O原子可与SA的-OH和COO-之间的配体交换诱导Ag NPs聚集,在530 nm产生新的吸收峰。(7)随着尿酸浓度的升高,400 nm的吸收峰强度降低,而530 nm处的吸收峰强度逐渐增加,同时伴随着颜色从亮黄色变为酒红色。在8.3×10-6~1.7×10-3 mol/L范围内,A530/A400值与UA浓度的对数之间呈现良好的线性相关(r=0.992),检出限为14.9μM;且尿液中常见的阴阳离子以及其他小分子如葡萄糖、抗坏血酸、尿素、肌酐等不干扰尿酸的测定。尿样加标回收率为92.0%~108.7%。结论设计了海藻酸钠-银纳米粒分析探针,并用于比色法检测尿液中的尿酸,为高尿酸血症、痛风及临床相关疾病的生化诊断提供了一种简便实用的技术手段。
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