论文部分内容阅读
目的： 脑缺血性疾病正给全人类的健康带来严重的威胁，中国传统医学中的针灸技术对脑缺血性疾病有明显的疗效，人们从传统针灸技术中发展出了电针刺治疗方法，且不断的有研究证明电针刺对改善该类疾病所导致的损伤有效。本课题组前期研究发现了大鼠的脑组织内ATP和腺苷(Adenosine，Ads)在电针刺预处理后120min的时间点有明显上升，并发现ATP代谢产物Ad在电针刺预处理引起的脑缺血耐受机制中起到保护作用。本实验将研究ATP在电针刺预处理诱导脑缺血耐受机制中的作用。 方法： 按照随机分组原则将40只SD大鼠分配于5组:电针组(EA)，生理盐水组(Saline)，P2受体拮抗剂苏拉明组(Suramin)，生理盐水+电针组(Saline+EA)，P2受体拮抗剂+电针组（Suramin+EA），每组八只。本实验采用大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型模拟脑缺血，将尼龙线栓从颈外动脉插入，经颈总动脉交叉沿颈内动脉，塞至大脑中动脉分叉处，2h后拔除线栓恢复再灌注。EA组为电针刺结束120min时MCAO模型成功造模;Saline组为侧脑室注射10μL生理盐水溶液后，安静放置150min时MCAO成功造模;Suramin组为侧脑室注射10μL浓度为100μM的suramin溶液，其余与Saline组相同;Saline+EA组为侧脑室注射10μL生理盐水后立即电针刺预处理，电针结束120min时MCAO模型成功造模;Suramin+EA组除侧脑室注射10μL浓度为100μM的Suramin外，其余操作与Saline+EA组相同。P2受体拮抗剂Suramin由生理盐水配制，浓度为100μM。侧脑室注射通过小动物立体定位仪和上面的微量注射泵实现。电针刺穴位为“百会穴”(GV20)和“风府穴(GV16)”。电针治疗仪的参数设定为1mA，2/15Hz，刺激时间30min。通过腹腔注射水合氯醛(10％，0.3ml/100g)使大鼠在实验操作过程中保持足够的麻醉深度，MCAO的制作控制在15min内。在大鼠脑缺血再灌注24h后观察并记录其神经行为学评分，随后立即断头取脑，冰冻后切片，使用TTC(2，3，5-triphenyltetrazolium chloride)染色法计算脑梗死体积百分比。 结果： 与Saline组脑相比，Saline+EA组神经行为学评分有明显改善，脑梗死体积明显减小，统计学差异有显著性(p＜0.05); Saline+EA组与EA组相比神经行为学评分和脑梗死体积无明显统计学差异; Suramin+EA组与Saline+EA组相比，脑梗死体积和神经行为学评分相比有显著统计学差异(p＜0.05); Suramin组的脑梗死体积和行为学评分好于Saline组，差异具有显著性(p＜0.05)。 结论： 电针刺预处理可以改善大脑中动脉阻塞模型大鼠的神经行为学评分和减少脑梗死体积，侧脑室注射P2受体拮抗剂Suramin抑制了对电针刺预处理后所产生的脑缺血耐受效应，推测ATP参与了电针刺预处理诱导脑缺血耐受的机制。