本文对阴茎局部肾素血管紧张素系统在糖尿病性勃起功能障碍中的作用及其机制进行了研究。本研究分为六个部分：　　 第一章：绪论。阴茎勃起是由多种生物活性因子及激素调控的神经血管性生物活动。勃起功能障碍是指阴茎持续性不能达到或维持充分勃起以获得满意性生活的一种病理状态。任何可以破坏勃起机制的因素都可以导致ED的发生。。糖尿病是勃起功能障碍的主要致病因素之一。糖尿病性勃起功能障碍(DiabaticErectile Dysfunction,DED)是男性糖尿病患者最常见的并发症之一。其发病率高达35-75％,为非糖尿病人的3倍。DED是一种由多因素引起的综合病症,病因主要涉及血管内皮系统的损害、糖尿病性外周神经的损害、内分泌紊乱及心理因素等。其中血管因素在DED形成过程中起着很重要的作用。糖尿病通过引起血管结构的改变(如粥样硬化、内皮增生、管壁损害等),可导致海绵体供血不足、缺血缺氧,从而使得阴茎组织结构发生改变。这一切构成了DED的组织学基础。在血管病变发展过程中,一些血管舒缩因子(如一氧化氮、前列环素、内皮素、Rho激酶,肾素血管紧张素等)和生长因子(如血管生长因子、转化生长因子)均发生了显著的改变,且与DED存在明显的相关性。因此对这些因子进行研究对于探索研究DED的机制和治疗十分有益。肾素血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS)是机体重要的内分泌网络,在保持血压和电解质平衡中扮演着很重要的角色。除了经典的RAS系统以外,阴茎海绵体内部也存在着局部RAS系统,而且该系统的作用非常显著。RAS系统最主要的生物活性物质血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)参与了勃起这一生理过程,其主要通过血管紧张素Ⅱ受体1型(AngiotensinⅡ receptor Type1,AT1)介导抑制勃起的发生。RAS系统的激活与多种疾病引起的勃起功能障碍的发生存在一定的联系。而采用RAS系统抑制剂可以显著改善多种勃起功能障碍患者的勃起功能。通过AngⅡ对其他血管床作用的临床研究,我们发现高水平的AngⅡ可以引起血管内皮功能的紊乱,血管重构和氧化应激等病理损害。这些损害都与勃起功能障碍的发生存在着相关联系。　　 第二章糖尿病大鼠模型的建立。采用腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)的方法来建立1型糖尿病模型。STZ一次性使用剂量为65mg/kg。注射3天后,空腹血糖大于300mg/dL的大鼠才入选下一步实验。共建立糖尿病模型3次,其中第一次建模20只,成功13只;第二次建模48只,成功32只;第三次建模42只,成功34只;注射一次造模成功率为71.8％。饲养8周后,糖尿病大鼠血糖显著上升,并出现明显的多饮,多食,多尿,消瘦,且毛发无光泽。　　 第三章：糖尿病状态下阴茎局部肾素血管紧张素系统的改变。采用免疫印迹法(Vvestern Blot),实时定量PCR(real time polymerase chainreaction,qPCR)和免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)来检测阴茎海绵体组织中RAS系统各个组分的表达情况,并进一步研究糖尿病状态下各组分表达的变化情况。我们发现阴茎海绵体组织中存在血管紧张素原(Angiotensinogen,AGT),血管紧张素转化酶(Angiotensin-converting enzyme,ACE),肾素及肾素原受体((pro)renin receptor,PRR),及AT1受体(AT1a亚型)的表达。我们采用免疫组织化学明确AT1受体在阴茎海绵体中定位于阴茎海绵体窦平滑肌细胞层,海绵体动脉平滑肌,阴茎海绵体内皮细胞及间质内的纤维细胞。在糖尿病状态下,AGT,ACE和PRR的表达都显著上升。这些阴茎海绵体中AngⅡ的前体及剪切相关酶表达明显增加,最终引起AngⅡ在阴茎海绵体局部水平的增加。同时AT1的表达量也明显增加,进一步放大了阴茎局部RAS系统的作用。这些实验结果为我们下一步实验采用洛沙坦治疗提供了理论依据。　　 第四章：抑制阴茎局部肾素血管紧张素系统对糖尿病大鼠勃起功能的影响。第一节：洛沙坦对于糖尿病大鼠勃起功能的影响。糖尿病大鼠模型建立成功后,我们采用灌胃的方式给予糖尿病大鼠肾素血管紧张素抑制剂(洛沙坦)治疗。给药剂量为30mg/kg/d,给药时间持续8周。8周后,采用电刺激勃起神经后测量阴茎海绵体内压技术来比较各组大鼠的勃起功能情况。实验结果显示:洛沙坦对于血压正常大鼠无明显降压作用;糖尿病未治疗组大鼠阴茎海绵体内压与颈动脉压力的比值显著低于正常对照组大鼠(0.329±0.020 vs.0.706±0.018,P＜0.01);经过8周洛沙坦治疗后糖尿病大鼠阴茎海绵体内压与颈动脉压力的比值较未治疗组有显著提高但仍旧低于正常水平(0.480±0.031,P＜0.01)。由此,我们得出结论:长期糖尿病状态可以导致大鼠勃起功能的下降;而洛沙坦口服治疗可以部分改善糖尿病大鼠的勃起功能状况。这一结果与我们预实验结果一致。第二节：洛沙坦对于阴茎局部肾素血管紧张素系统的抑制作用。采用放射免疫测定法,western blot,实时定量PCR和免疫组织化学方法,来检测各组实验大鼠阴茎局部RAS系统各个组分的变化情况。我们发现,糖尿病状态下RAS系统各组分的表达情况与第三章结果一致,都呈明显激活状态。给予洛沙坦治疗后糖尿病大鼠阴茎海绵体中除ACE无明显变化外,其他组分(包括AGT,PRR,AngⅡ和AT1)都显著降低。根据实验结果,我们提出大鼠阴茎海绵体中存在一个依赖于AT1受体生成AngⅡ的正反馈系统。洛沙坦可以阻断这一正反馈系统,但是不能逆转糖尿病本身所导致的AngⅡ水平的升高。因此,使用洛沙坦后,糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中AngⅡ的水平仍高于正常对照组。由以上结果我们得出,洛沙坦的应用可以抑制糖尿病状态下阴茎局部RAS系统的激活。综上所述,阴茎海绵体组织中RAS系统的激活是导致糖尿病大鼠勃起功能下降的一个因素,而通过抑制该系统可以促进糖尿病大鼠勃起功能的恢复。　　 第五章阴茎局部肾素血管紧张素系统激活导致勃起功能障碍的机制研究。通过细胞学实验及动物实验两部分来测定AngⅡ对RhoA/Rho激酶系统的影响。细胞学实验部分:我们成功分离了大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞;在给予AngⅡ处理后,采用酶链免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)及western blot来测定Rho激酶活性及Rho激酶系统各组分的表达。我们发现经AngⅡ处理后阴茎海绵体平滑肌短时间内出现Rho激酶活性的增加,8小时后Rho激酶系统各个组分的表达量也开始显著增加。由此我们可以得出,AngⅡ可以激活阴茎海绵体平滑肌细胞内的Rho激酶系统,且该激活作用可以分为两方面:短时作用和长时作用。动物实验部分,我们采用western blot技术来测定第三次造模各组实验动物RhoA的活性及Rho激酶的表达,同时比较各组间的差异。我们发现糖尿病状态下,RhoA的活性及Rho激酶的表达都显著上升,提示Rho激酶系统的激活;给予洛沙坦治疗后,RhoA的活性显著降低,且Rho激酶的表达恢复正常。由此反证了AngⅡ可能通过影响RhoA/Rho激酶通路发挥对勃起功能的影响作用。通过阴茎海绵体平滑肌细胞模型来研究AngⅡ对PDE5A表达水平的影响。给予100nM AngⅡ处理后,分别采用PDE5A启动子活性检测实验,实时定量PCR和western blot方法测定了AngⅡ对PDE5A基因和蛋白表达水平的影响。我们发现,AngⅡ可以显著上调PDE5A基因表达水平,同时western blot结果证实PDE5A的蛋白水平也显著提高。由此我们得出以下结论,AngⅡ可以增加PDE5A在基因和蛋白层面的表达水平。这可能参与了勃起功能障碍的发生过程。　　 第六章：洛沙坦对糖尿病勃起功能障碍患者疗效的观察。为明确洛沙坦对于DED患者勃起功能的影响,我们从男科及内分泌科门诊中选取了29名患有不同程度勃起功能障碍的2型糖尿病患者(＞40岁),并且给予50mg/d洛沙坦口服治疗。治疗维持12周。通过比较服药前后患者IIEF5问卷调查表2,3项得分情况来判断该治疗是否有效(两者之和变化≥5分为显效,2-4分为有效,有效与显效合计为总有效率)。然后依据ED的严重程度、糖尿病病龄、ED病龄和年龄分组来研究各个因素对于洛沙坦治疗糖尿病性ED的影响。结果显示:洛沙坦对DED患者的总有效率为58.62％。其疗效与ED的严重程度、糖尿病病龄有明确的相关性,而与ED病龄、患者年龄与疗效之间的关系由于病例数量且治疗的疗程仅为仅为12周等因素的影响,其结果尚未达到统计学差异。此项研究仍在进行中。结论:洛沙坦对于程度较轻,糖尿病病程较短的糖尿病患者的勃起功能有较好的保护作用。　　 研究结论：糖尿病状态下,阴茎局部RAS系统显著激活,阴茎局部AngⅡ水平明显升高;升高的AngⅡ水平一方面可以直接引起阴茎海绵体收缩的增强,另一方面还可以通过调节其他舒缩因子从而引起阴茎海绵体收缩机制的增强,这两方面作用最终促进了DED的发生。我们通过动物及临床实验证实,抑制阴茎局部RAS系统有助于糖尿病状态下勃起功能的恢复,同时这一结果进一步证明了阴茎RAS系统激活与糖尿病勃起功能障碍存在显著的相关性。