【摘 要】
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猪流感（swine influenza,SI）是由猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）引起的一种以呼吸道症状为主的传染性极强的疾病。目前,猪群中主要流行的是H1N1、H1N2和H3N2亚型猪流感病毒。由于猪呼吸道内同时含有α-2,3和α-2,6乳糖苷唾液酸受体,所以被认为是A型流感病毒的天然“混合器”。禽源、人源、猪源流感病毒可在猪体内发生重组产生新型病毒,并传播到人群
【基金项目】
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禽流感等动物疫病新型疫苗研制关键核心技术研究与应用（粤财农[2015]141号）；
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猪流感（swine influenza,SI）是由猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）引起的一种以呼吸道症状为主的传染性极强的疾病。目前,猪群中主要流行的是H1N1、H1N2和H3N2亚型猪流感病毒。由于猪呼吸道内同时含有α-2,3和α-2,6乳糖苷唾液酸受体,所以被认为是A型流感病毒的天然“混合器”。禽源、人源、猪源流感病毒可在猪体内发生重组产生新型病毒,并传播到人群中引起大流行,给公共卫生造成严重威胁。广东地区由于其独特的地理位置、饲养条件、人口密度和饮食文化,被认为是流感病毒的独特生态圈。所以,进一步加深对广东地区猪流感病毒流行情况、基因片段来源以及生物学特性的研究势在必行。为此,本研究选取广东地区猪流感病毒作为研究对象,通过对猪流感病毒的流行情况、遗传演化、致病性特点进行分析,解析广东地区流行的猪流感病毒的生物学特性。本研究于2016～2017年间在广东地区共采集猪鼻拭子样品1522份,其中养猪场287份,生猪屠宰场1235份;血清132份。通过对猪鼻拭子样品的核酸进行流感病毒M基因的RT-PCR检测,结果表明M基因阳性样品有69份,阳性率4.53%。其中,猪场有15份,拭子阳性率5.23%,屠宰场有54份,拭子阳性率4.37%。通过感染MDCK细胞对M基因RT-PCR阳性样品进行病毒分离,共分离到13株流感病毒,样品总分毒率为0.85%。其中,从养猪场样品中分离到8株病毒,病毒分离率为2.79%,从生猪屠宰场样品中分离到5株病毒,病毒分离率为0.4%。应用H1和H3阳性血清,通过HI实验对所分离的13株病毒进行鉴定,结果显示4株为H1亚型,9株为H3亚型。血清学结果显示H1亚型SIV血清阳性率26.5%（35/132）,HI滴度2log2～7log2;H3亚型SIV血清阳性率27.3%（36/132）,HI滴度1log2～7log2,A型流感病毒血清总阳性率53.8%。所测血清样品中未发现H1和H3的交叉感染现象。全基因组测序分析结果显示:所有分离病毒均偏嗜结合α-2,6半乳糖苷受体;H1亚型毒株HA基因属于欧亚类禽分支,H3亚型毒株HA基因属于近期人源分支,N1基因分布于欧洲猪流感分支,N2基因分布于北美猪源和近期人源分支。PB2、PB1、PA和NP基因均来自2009A/H1N1分支。M基因来源于2009A/H1N1分支和欧亚类禽分支,NS基因来源于2009A/H1N1分支和北美猪源分支。H1亚型SIV分为2个基因型,H3亚型SIV分为5个基因型。PB2蛋白Q591R、A588I和T339K和M1蛋白N30D、T215A以及NS1蛋白P42S的突变使毒株呈现出对哺乳动物的嗜性。PB1蛋白第13位氨基酸为P,在人流感病毒中保守,呈现出人源流感毒株的分子特性。为测定所分离毒株的致病能力,选取了6株滴度≥10~6TCID50 SIV进行小鼠感染实验,其中包括2株H1N2和4株H3N2,结果显示毒株GD/A41引起小鼠体重减轻超过25%,可致死80%小鼠。其余5株SIV不致死小鼠,仅引起小鼠体重轻微变化。6株SIV均可在呼吸系统复制,在肺中滴度最高。感染14天后小鼠血清均转阳,其中毒株GD/A1720诱导HI抗体最高可达7log2～9log2。综上所述,本研究通过对2016～2017年间广东地区流行的猪流感病毒进行了病毒分离鉴定、血清学检测以及对小鼠致病性的探究,为进一步了解广东地区猪流感病毒的流行情况以及其生物学特点提供了一定的理论依据和数据支持,为猪流感病毒综合防控提供了参考。
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