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新药剂的研发及安全性评价对农业生产、食品安全具有重要的意义,本研究选取生物源农药喜树碱及化学合成农药有机磷为对象,建立了免疫检测分析方法,以期对后续药物改造及安全检测提供技术手段。喜树碱是迄今为止发现的唯一的专门抑制拓扑异构酶Ⅰ的天然植物活性成分,喜树碱及其衍生物不仅具有很好的抗肿瘤效果,而且对农业害虫防治也具有效果。科学家们对喜树碱进行了基于结构活性的抗癌药物改造,而利用基因工程抗体技术、蛋白质组技术从细胞和分子水平对喜树碱作用机制进行进一步研究具有重要意义。有机磷类化学农药是一类具有相同毒性作用机理的家族类小分子化合物,具有高效、广谱的杀虫的效果,也是用量最大、用途最广的一类化学品,但其累积毒性是一个严重的食品安全问题,因此,灵敏、广谱的检测技术的开发对有机磷类农药残留检测以及保障食品安全具有重要意义。本研究在前人工作经验的基础上,研究探讨了半抗原结构与抗体特异性的关系。研究探讨了不同结构位点(7位、20位)改造的喜树碱半抗原与相同载体蛋白KLH偶联,以其为免疫原制备特异性单克隆抗体;研究探讨了同一种有机磷类通用半抗原与不同载体蛋白KLH和BSA偶联后,在制备获得的单克隆抗体对有机磷类农药的检测谱及检测灵敏度上的差异,并以制备得到的通用有机磷类特异性杂交瘤细胞为原料,采用PCR技术扩增抗体可变区基因,构建单链抗体基因,分析抗体可变区结构构象与广谱识别活性的关系,为后续的基因抗体改造提供基础。主要研究结果如下:(1)以完全抗原7-CPT-KLH免疫小鼠的多抗血清效价约为800倍稀释,只识别半抗原7-CPT,其I50为2.193μg/mL,对喜树碱无识别;以20--CPT-KLH免疫小鼠的多抗血清效价约为250000-500000倍稀释,对半抗原和喜树碱都有识别,多抗血清对20-CPT的I50为8.100μg/mL,多抗血清对喜树碱的I50为235.020μg/mL,20-CPT可以作为半抗原用来制备喜树碱特异性单克隆抗体;以20-CPT-KLH为免疫原筛选得到杂交瘤细胞株1G9,其细胞培养上清对喜树碱的I10为 0.894μg/mL,I50 为 338.844μg/mL。(2)采用完全抗原BPB-KLH和BPB-BSA制备得到BPB-KLH-3H6G3单克隆抗体和BPB-BSA-3D2B3单克隆抗体;将两种单抗用于有机磷类农药检测,BPB-KLH-3H6G3单克隆抗体检测到的I50小于30μg/mL的有机磷类农药有13种,BPB-BSA-3D2B3单克隆抗体检测到的I50小于30μg/mL的有机磷类农药有8种,且这两种单抗对这些有机磷类农药的最低检测限各不相同。(3)分别以BPB-KLH-3H6G3杂交瘤细胞和BPB-BSA-3D2B3杂交瘤细胞为原材料扩增出抗体可变区基因,并对可变区基因序列进行比对分析;采用重叠延生PCR(SOE-PCR)方法将重、轻链基因连接起来构建出单链抗体基因KLH-scFv和BSA-scFv,对其碱基序列进行比对分析,并进行三维结构的模拟。