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背景胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,病理分期较早的患者可通过手术联合化疗取得较好的疗效,病理分期晚的患者预后差,五年生存率低于10%,复发转移是导致胃癌患者死亡的主要原因。因此,寻找胃癌转移相关分子和预测预后有效的生物学标志分子一直是胃癌基础和临床研究的热点。近年的研究发现,热休克蛋白家族参与肿瘤的发生发展,与多药耐药、异常增殖、侵袭转移等恶性生物学表型相关。HSP27作为HSPs亚家族小分子热休克蛋白的成员之一,也参与了多种恶性疾病的发生发展,它可以通过不同信号通路调控多种肿瘤的增殖、耐药、转移等恶性生物学表型。有文献报道,HSP27在胃癌组织中表达水平升高,与患者预后情况呈负相关,但其具体机制尚不清楚,关于其与胃癌侵袭转移的关系至今还鲜有文献报道。本研究将以此为切入点展开研究,通过分析HSP27表达水平与胃癌细胞侵袭转移能力之间的关系,探讨以HSP27作为胃癌患者预后判断标志分子和治疗靶点的应用前景。目的1.检测HSP27在胃癌组织和细胞中的表达,分析其表达水平与临床特征之间的关系。2.研究HSP27对胃癌细胞体内体外侵袭转移能力的影响。3.初步探讨HSP27影响胃癌细胞侵袭转移能力的机制。方法1.检测HSP27蛋白在胃癌组织及细胞中的表达1)免疫组织化学染色检测HSP27在胃癌组织中的表达和分布,分析HSP27在胃癌中的表达强度与临床病例特征及预后的相关性。2) Western blot检测不同转移潜能胃癌细胞系中HSP27蛋白的表达水平。2. HSP27对胃癌细胞侵袭转移能力的影响1)利用Transwell实验及细胞划痕实验,检测下调HSP27表达后胃癌细胞体外侵袭转移能力的变化。2)利用裸鼠体内尾静脉注射转移试验,观察不同HSP27表达水平的胃癌细胞体内转移能力的差异。3. Western blot方法检测下调HSP27表达的胃癌细胞中转移相关分子的蛋白表达改变。结果1.在118例胃癌组织中,HSP27的阳性表达率为69%(71/118)。统计学分析患者临床病理结果显示,HSP27蛋白的表达水平与淋巴结受累和高级别病理学分期呈显著正相关性,而与年龄、性别、分化程度(p>0.05)无统计学差异;并且HSP27表达越强,在随访的4年中胃癌患者生存率越低。2. Western blot和qRT-PCR方法对不同转移潜能胃癌细胞系的HSP27蛋白水平和mRNA水平进行检测,结果显示:在转移潜能较高的MKN28-M、9811-P、SGC7901-M细胞系中HSP27表达水平高,而转移潜能较低的胃癌细胞系MKN28-NM、9811、SGC7901-NM中HSP27表达则较低。3.胃癌细胞系MKN28、BGC823细胞转染慢病毒siRNA下调HSP27的表达,westernblot和qRT-PCR结果证实,HSP27的表达水平明显降低。4. Transwell及细胞划痕实验检测发现,与对照组细胞相比,HSP27表达下调的细胞MKN28-si、BGC823-si的体外侵袭转移能力明显减弱。5.裸鼠尾静脉注射转移实验结果显示,与NC对照组相比,HSP27表达下调的MKN28-si、BGC823-si细胞在祼鼠肺脏的转移瘤发生率明显降低。6. Western blot结果显示,HSP27表达下调的胃癌细胞MKN28-si、BGC823-si中,基质金属蛋白酶分子MMP-9水平明显降低,而MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表达水平无明显改变。结论:1. HSP27表达水平与胃癌的侵袭转移能力正相关,胃癌中HSP27蛋白表达水平越高,其出现淋巴结转移受累和较高病理学分期的概率越大。HSP27表达水平与胃癌患者的生存率呈负相关,HSP27有望成为胃癌患者临床预后判断新的生物分子标志物。2.降低胃癌HSP27的表达水平,能够抑制其体外、体内的侵袭转移能力。HSP27有可能成为抗胃癌转移治疗的潜在分子靶点。3. HSP27促胃癌侵袭转移的作用可能部分通过调节MMP-9的表达来实现,其具休分子机制尚需进一步研究。