【摘 要】
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目的:基于精子发生微环境探讨加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张（varicocele,VC）模型大鼠生精细胞凋亡的调控,评价加味大黄蟅虫颗粒对VC模型大鼠睾丸生精功能的保护作用。方法:选取40只清洁级青春期雄性SD大鼠,按随机数字表法分成假手术组、模型组、迈之灵组及加味大黄蟅虫颗粒组,每组10只。参照Turner部分左肾静脉缩窄术建立VC大鼠模型。造模完成后,假手术组及模型对照组大鼠均给予生理盐水,迈
【基金项目】
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2015年国家自然科学基金项目:加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张性不育模型大鼠附睾局部“微环境”的调控（No.81560774）；
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目的:基于精子发生微环境探讨加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张（varicocele,VC）模型大鼠生精细胞凋亡的调控,评价加味大黄蟅虫颗粒对VC模型大鼠睾丸生精功能的保护作用。方法:选取40只清洁级青春期雄性SD大鼠,按随机数字表法分成假手术组、模型组、迈之灵组及加味大黄蟅虫颗粒组,每组10只。参照Turner部分左肾静脉缩窄术建立VC大鼠模型。造模完成后,假手术组及模型对照组大鼠均给予生理盐水,迈之灵组给予迈之灵片54mg/kg,溶于20m L生理盐水中,加味大黄蟅虫颗粒组予以含生药10.8g/kg加味大黄蟅虫颗粒水冲剂,以上各组灌胃体积均为1m L/100g,1次/d,持续8周。给药8周后,将各组大鼠进行称重并断颈处死,开腹取出双侧睾丸及附睾组织。运用精子计数板和彩色精子质量分析系统检测大鼠附睾精子质量,HE染色观察各组大鼠睾丸局部显微结构的病理变化,透射电镜观察各组大鼠睾丸局部超微结构的病理变化,流式细胞仪检测各组大鼠睾丸生精细胞凋亡情况,荧光定量PCR检测各组大鼠睾丸组织中凋亡基因Fas、Fas L、Caspase-3、Caspase-9的表达含量。结果:1.一般情况分析:造模完成后,各组大鼠均出现不同程度的精神萎靡、活动减弱、进食及饮水减少,随后模型组出现不同程度的毛发干枯、光泽晦暗等症状,部分大鼠甚至出现毛发脱落的情况,但以上情况至术后1周呈逐渐好转趋势;各组大鼠的体质量在实验阶段基本呈增长趋势,但组内比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。2.精液质量结果显示:相较于假手术组,模型组精子密度、精子活3.率明显降低,左精索静脉直径明显增加（P＜0.01）;相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组精子密度、精子活率均明显改善,左精索静脉直径均显著降低（P＜0.01）;相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组精子密度、精子活率均有所改善（P＜0.05）,而左精索静脉直径未见明显差异（P＞0.05）。4.显微超微结构结果分析:假手术组生精细胞完整且层次清晰,浆内多见适量的细胞器、丰富的线粒体;模型组多见未成熟的生精细胞,出现空泡变性;迈之灵组管腔内见多数生精细胞,内质网及线粒体排列整齐;加味大黄蟅虫颗粒组管腔内见大量成熟生精细胞,浆内可见大量大量的线粒体、溶酶体、高尔基体及精子。5.流式细胞仪检测结果显示:相较于假手术组,模型组生精细胞凋亡率明显升高（P＜0.01）;相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组生精细胞凋亡率均有所降低（P＜0.01）;相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组生精细胞凋亡率均有所降低（P＜0.05）。6.荧光定量PCR检测结果显示:（1）Fas:相较于假手术组,模型组睾丸生精细胞凋亡基因Fas表达明显升高（P＜0.01）;相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组Fas明显下降（P＜0.01）;相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组能有效降低Fas表达（P＜0.05）;（2）Fas L:相较于假手术组,模型组睾丸生精细胞凋亡基因Fas L表达明显升高（P＜0.01）;相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组Fas L有效降低（分别为P＜0.05,P＜0.01）;相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组能有效降低Fas L表达（P＜0.05）;（3）Caspase-3:相较于假手术组,模型组睾丸生精细胞凋亡基因Caspase-3表达明显升高（P＜0.01）;相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组Caspase-3有效下降（分别为P＜0.05,P＜0.01）;相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组能明显降低Caspase-3表达（P＜0.05）;（4）Caspase-9:相较于假手术组,模型组睾丸生精细胞凋亡基因Caspase-9表达明显升高（P＜0.01）;相较于模型7.组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组Caspase-9含量明显下降（P＜0.01）;相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组Caspase-9表达下调未见明显差异（P＞0.05）。结论:1.本实验研究参照Turner经典造模法成功建立VC大鼠模型,且研究发现模型大鼠睾丸病理组织严重受损,生精细胞凋亡明显,凋亡基因Fas、Fas L、Caspase-3、Caspase-9表达显著上升,表明生精细胞过度凋亡可能是VC性不育症的主要细胞分子机制。2.加味大黄蟅虫颗粒可显著改善VC模型大鼠精液质量,并发挥对大鼠睾丸组织损伤的保护作用,从而改善睾丸局部微环境,为精子的发育成熟提供有利条件,这可能与其有效调控生精细胞凋亡有关。
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