论文部分内容阅读
研究背景:高血压因其对心脏、肾脏、血管系统等靶器官的损伤,成为构成全球性死亡率的主要危险因素。目前高血压的治疗方法不能消除高血压带来的靶器官损伤。因此我们极需研究新的高血压治疗靶点。最近几十年的研究表明,高血压患者体内或者高血压动物模型体内血清免疫球蛋白增高。但是免疫球蛋白或者B淋巴细胞是否是促进高血压发生发展的原因尚不可知。在本次研究中,我们试图通过研究B淋巴细胞和有高亲和力并经过类别转换的免疫球蛋白在高血压及靶器官损伤中的作用来证实B淋巴细胞和B淋巴细胞是否可以作为可行的高血压治疗靶点。研究方法:1、给予WT小鼠4周正常剂量血管紧张素Ⅱ(AngⅡ(490ng/kg/min))、2周无刺激休息期、2周低剂量AngⅡ(140ng/kg/min)或者载体对照。8周后用流式细胞术的方法检测骨髓内的记忆B细胞和浆细胞含量。2、从正常剂量AngⅡ诱导的高血压小鼠或者载体对照作用后的正常血压小鼠体内分离纯化血清IgG,将纯化后的IgG注射到受体WT小鼠体内,并给予受体小鼠低剂量AngⅡ刺激。我们比较了注射高血压IgG和正常血压IgG的受体小鼠的血压、主动脉炎症、血管舒张功能、肾脏组织炎症、尿白蛋白/肌酐比值、T细胞分泌细胞因子的功能。3、作为研究有高亲和力并经历过类别转换的免疫球蛋白的另一种方法,我们使用了Aicda基因敲除小鼠。给予雄性和雌性Aicda-小鼠和Aicda / 小鼠4周正常剂量AngⅡ的刺激。4周后,我们分别比较了雄性和雌性Aicda-/小鼠和Aicda / 小鼠的血压、主动脉炎症、主动脉重塑、小血管舒张功能、肾脏组织炎症、尿白蛋白/肌酐比值、T细胞分泌细胞因子的功能等。4、为了验证B细胞是否通过IgM或者其他非产生免疫球蛋白的免疫功能参与AngⅡ诱导的高血压,我们研究了基因敲除IgM重链而导致的全身性严重B细胞缺乏的μMT-/-小鼠。给予μMT-/-小鼠和WT小鼠4周正常剂量的AngⅡ,我们比较了两组小鼠的血压、主动脉炎症、主动脉重塑、尿白蛋白/肌酐比值、T细胞分泌细胞因子的功能。5、为了研究B细胞是否促进盐敏感性高血压的发生发展,给予雄性μMT-/-小鼠和WT小鼠切除一侧肾脏、皮下放置醋酸脱氧皮质酮(DOCA)缓释片和喂1%氯化钠盐水1天(DOCA-salttreatment)。我们比较了两组小鼠的血压、主动脉炎症、血管舒张功能、尿白蛋白/肌酐比值、T细胞分泌细胞因子的功能。6、比较Aicda-/-小鼠、μMT-/-小鼠和BAFF-R-/-小鼠的不同,我们提出假设:B1细胞在高血压的发生发展中起保护作用。为了验证这一假设,分离提取Aicda / 小鼠腹腔B1细胞,将正常B1细胞注射到Aicda-/-小鼠体内,用PBS作为对照。我们比较了两组小鼠的血压、主动脉炎症、肾脏炎症、肾小球损伤(尿白蛋白/肌酐比值)、T细胞分泌细胞因子的功能和血清免疫球蛋白的含量。研究结果:1、两组WT小鼠分别接受了AngⅡ AngⅡ或者AngⅡ Vehicle的刺激。我们分离了两组小鼠的骨髓细胞,用流式细胞术检测发现受到AngⅡ重复刺激的小鼠骨髓内B记忆细胞的含量显著增高,浆细胞的含量有增高趋势。2、注射HTNIgG小鼠的主动脉组织内炎症细胞的数量稍高于注射VehicleIgG小鼠。两组小鼠在血压、肠系膜动脉内皮依赖性和非依赖性舒张功能、肾小球损伤(尿白蛋白/肌酐比值)、肾脏组织炎症细胞数量和T细胞分泌细胞因子功能等方面没有显著差异。3、4周正常剂量AngⅡ作用后,雄性和雌性Aicda-/-小鼠体内几乎检测不到血清IgG和IgA,但是IgM含量有补偿性增高。4周正常剂量AngⅡ作用后,雄性和雌性Aicda-/-小鼠与Aicda / 小鼠主动脉及肾脏组织内的适应性和固有免疫细胞数量、主动脉中层厚度、尿白蛋白/肌酐比值没有显著差异。AngⅡ重复刺激后,雄性和雌性Aicda-/-小鼠的高血压反应与Aicda / 小鼠仍无明显差异。4、4周正常剂量AngⅡ作用后,μMT-/-小鼠在主动脉组织内基本检测不到B细胞的存在。μMT-/-小鼠的血压、主动脉内T细胞和巨噬细胞数量、主动脉中层厚度、尿白蛋白/肌酐比值、CD4 T细胞分泌IL-17A和IL-21与WT小鼠无显著差异,μMT-/-小鼠CD8 T细胞分泌IFNγ的含量稍低于WT小鼠。5、DOCA-salt作用21天后,μMT-/-小鼠的血压、肠系膜动脉内皮依赖性和非依赖性血管舒张功能、主动脉T细胞数量、与WT小鼠无显著差异,μMT-/-小鼠主动脉内巨噬细胞数量稍低于WT小鼠。6、在正常剂量AngⅡ作用下,腹腔注射Aicda / B1细胞的Aicda-/-小鼠的血压、尿白蛋白肌酐比值低于注射PBS的Aicda-/-小鼠和注射PBS的Aicda / 小鼠。研究结论:1、高血压可诱导B细胞的免疫记忆反应。2、WT受体小鼠注射高血压小鼠血清IgG后诱导的高血压反应与注射正常血压小鼠血清IgG相比无显著差异。3、Aicda基因敲除不影响AngⅡ诱导雄性和雌性小鼠的高血压反应,提示B细胞分泌的免疫球蛋白不参与高血压的病理生理机制。4、μMT-/-小鼠在正常剂量AngⅡ作用下的高血压反应与WT小鼠无明显差异,提示B细胞缺乏不影响AngⅡ诱导的高血压反应。5、μMT-/-小鼠在DOCA-salt模型作用下的高血压反应与WT小鼠无明显差异,提示B细胞缺乏不影响盐敏感性高血压反应。6、注射Aicda / B1细胞可以减轻正常剂量AngⅡ诱导的Aicda-/-小鼠的高血压反应,提示B1细胞在高血压的发生发展中起保护作用。