SOX12在恶性脑胶质瘤细胞中的作用及其机制研究

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背景:神经胶质瘤是头颈部最常见的恶性脑肿瘤之一,因为恶性脑胶质瘤呈浸润性生长,手术难以完整切除,再加上其具有对放、化疗抵抗的特性,所以恶性脑胶质瘤往往容易复发。其中胶质母细胞是胶质瘤中恶性程度最高的肿瘤,目前标准治疗方法为在不严重损害神经功能的前提下尽可能完整的手术切除肿瘤病灶,辅以术后的放化疗及免疫治疗,但恶性脑胶质瘤患者的预后仍差,复发率高,生存期短。因此,通过研究恶性脑胶质瘤的具体发病机制及有效的分子作用靶点仍有着广阔的前景,对指导恶性脑胶质瘤的治疗及预后分析都有着及其重大的意义。前期相关研究显示,SOX家族成员参与多种恶性肿瘤的发生进展,但关于SOX12在参与介导脑胶质瘤恶性增殖的具体发病机制,目前仍有所争议及没有太多的研究报道。因此,我们的研究主要深入研究关于SOX家族C组成员SOX12对恶性脑胶质瘤增殖及侵袭的影响。研究目的:1、检测SOX12在正常脑胶质细胞和恶性脑胶质瘤细胞中的表达水平。2、验证SOX12基因表达水平变化对恶性脑胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。3、探索SOX12调控恶性脑胶质瘤细胞增殖及侵袭的具体信号通路。研究方法:1、选取了人恶性脑胶质瘤细胞系U87、U118、U251、T98G为实验组,脑正常胶质细胞系HEB为作为对照组,通过q RT-PCR和western blot实验检测在恶性脑胶质瘤细胞系、人脑正常胶质细胞系中SOX12基因的m RNA和蛋白的表达水平。2、选取了与正常脑胶质细胞系HEB对照SOX12表达差异最明显的两株胶质瘤细胞系进行后续实验,将两株恶性脑胶质细胞系转染SOX12过表达质粒,通过q RT-PCR和western blot实验验证过表达SOX12后对恶性脑胶质瘤细胞m RNA和蛋白水平的影响;通过CCK-8、细胞划痕、transwell小室及western blot等实验验证上调SOX12表达后对恶性胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响。3、通过western blot实验验证上调SOX12表达后对MAPK信号通路相关蛋白表达的影响。研究结果:1、与正常人脑胶质细胞系HEB相比,SOX12在四株恶性脑胶质瘤细胞系U87、U118、U251、T98G的基因表达水平更低,其中以U87和U251两株细胞系最为明显,且有统计学意义。2、与阴性对照组相比,上调SOX12表达后恶性脑胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显下降,而肿瘤细胞的促凋亡标记物增加。3、与阴性对照组相比,上调SOX12表达后,磷酸化P-ERK1/2、P-P38蛋白含量占非磷酸化蛋白ERK1/2,P38的比例明显下降。结论:1、SOX12在恶性脑胶质瘤细胞中低表达。2、SOX12抑制恶性脑胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭,促进胶质瘤细胞凋亡,是重要的抑癌基因。3、SOX12通过抑制磷酸化MAPK信号通路相关蛋白表达,从而进一步抑制恶性脑胶质瘤细胞增殖及侵袭能力。
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