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超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,简称SOD)广泛存在于动物、植物及藻类等生物体内,本文以牛血为实验原材料,进行了牛血Cu/Zn-SOD最佳提取条件的优化,然后采用层层自组装技术制备了包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚电解质微囊,最后将包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚电解质微囊进行了胰蛋白酶水解实验。结果如下: ⑴研究了Cu2+浓度、Zn2+浓度、热变性温度和热变性时间4种单因素分别对牛血中Cu/Zn-SOD活性的影响。以4种单因素为基础设计了4因素5水平正交试验,通过邻苯三酚法测定了Cu/Zn-SOD活性,考马斯亮蓝法测定了Cu/Zn-SOD含量,聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了蛋白纯度,确定了牛血Cu/Zn-SOD的最佳提取条件。结果表明:当Cu2+、Zn2+分别为6 mmol/L和12 mmol/L条件下,90℃热变性35 min,最终提取的Cu/Zn-SOD活性为4.14×103 U/mL,比活力为6.74×104U/mg。 ⑵采用了层-层自组装技术制备了包含超氧化物歧化酶(SOD)的聚电解质微囊,以无定形态碳酸钙颗粒为模板,采用共沉淀原理,将SOD吸附到碳酸钙颗粒中。在碳酸钙表面组装聚苯乙烯磺酸钠[poly(sodium styrene sulfonate),PSS]和聚烯丙基胺盐酸盐[poly(allyamine hydrochloride),PAH],得到以碳酸钙颗粒为母核,PSS/PAH为壳的核壳结构的颗粒。用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶解碳酸钙,然后加入0.2M的Cu2+、0.2M的Zn2+,从而恢复SOD活性,得到了包含SOD的聚电解质微囊。 ⑶将包裹了聚电解质微囊的SOD与天然SOD进行胰蛋白酶水解试验,结果为包裹前的SOD活性为3.02×103U/mL,其蛋白含量为0.059 mg/mL,比活力为5.14×104U/mg,包裹后SOD活性为2.61×103 U/mL,蛋白含量为0.047 mg/mL,比包裹前的蛋白质含量减少0.012 mg/mL,即包裹率为79.41%,比活力为5.60×104 U/mg,经胰蛋白酶水解4h后,包裹了聚电解质微囊的SOD在240min时,活性为1.99×103U/mL,相对比活力为75.53%,而天然SOD活性为8.65×102U/mL,相对比活力为28.71%,证明将SOD用聚电解质微囊微囊包后对SOD的活性起到了一定保护作用。