纳米金体外递送miR-375治疗肝癌的实验研究

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原发性肝癌(Primary liver cancer,PLC,简称肝癌)是一种全球性高度恶性的肿瘤,其致死率在所有癌症中排名第三位,严重威胁着人类的健康。手术切除仍然是目前治疗肝癌的首选,但此方法存在着众多缺点,如适用患者有限、术后易复发、生存率低等。因此致力于发现治疗肝癌的新的分子靶点和探索新的抗肝癌药物成为肝癌研究的重要方向。在前期研究中,我们发现肝癌细胞与肝癌组织较正常细胞与正常组织,miR-375有明显过低表达的情况。前期研究还证实了,上调miR-375的表达可以在体内外抑制肝癌的生长。但是现有的药物递送系统多数具有不良的免疫反应、潜在的生物不安全性、细胞毒性、较低的靶向性和携带效率等缺陷。因此,寻求一种新型核酸递送载体迫在眉睫。  在本研究中,我们为了利用纳米金递送miRNA,首先通过两种不同的水相还原法制备得到粒径为十几纳米的纳米金溶胶,并通过形貌、粒径分布等优选出Frens法为更为合适的纳米金溶胶制备方法。该方法制备得到的纳米金溶胶形貌呈现良好的球形、粒径均一、分散性也很好。在超纯水溶解,4℃保存条件下,该纳米金溶胶能够在60 d内保持很小范围的粒径变化。紧接着,我们通过Au-S共价键吸附成功将miR-375 mimics偶联至金球表面,偶联后的纳米金溶胶在红移了4个纳米的525 nm出现最大紫外-可见吸收。之后,结合TaqMan qRT-PCR、FACS(Fluorescence Activated Cell Sorter)和荧光显微成像,我们在HepG2、Hep3B和Huh7这三株肝癌细胞系中证实纳米金miR-375偶联物能够很好地被细胞所摄取。流式结果中,得到了高达96%的阳性率。最后,我们还发现通过纳米金的递送上调细胞内 miR-375的表达后,肝癌细胞的生长受到了显著抑制,并且呈现一定范围的剂量依耐性。这些结果都表明:我们参考Frens法制备的纳米金溶胶粒径合适、分散性与均一性良好,在偶联 miR-375后能够很好地被细胞所摄取。该纳米金miRNA偶联物能够成功上调肝癌细胞内miR-375的表达,继而产生明显抑制肝癌细胞生长的效果,进而证实了miR-375在肝癌细胞生长中起到重要作用,揭示了miR-375是潜在的肿瘤药物的新靶点。
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