【摘 要】
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目的:肝细胞癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,并且没有治愈性治疗方案。中草药以其高效、低毒等特点成为抗HCC药物的重要宝库。为探究龙血竭的75%乙醇提取物（75%ethanol extract from Resina Draconis,ERD）能否在体外和体内两个水平上发挥出抗肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的活性。方法:使用75%乙醇制备ERD。使用MTS法
【基金项目】
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国家自然基金（No.81771947）；
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目的:肝细胞癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,并且没有治愈性治疗方案。中草药以其高效、低毒等特点成为抗HCC药物的重要宝库。为探究龙血竭的75%乙醇提取物（75%ethanol extract from Resina Draconis,ERD）能否在体外和体内两个水平上发挥出抗肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的活性。方法:使用75%乙醇制备ERD。使用MTS法测定ERD处理后的肝癌细胞活性。使用Hoechst染色法、Western blot法检测相关蛋白评估ERD处理后肝癌细胞的凋亡情况。使用q RT-PCR检测相应m RNA变化水平。用亚致死剂量的ERD处理有效转染Survivin si RNA的SK-Hep-1细胞,然后通过Hoechst染色和Western印迹评估细胞的凋亡水平。使用划痕愈合、Transwell法评估ERD对肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响。构建Bel-7404来源的裸鼠移植瘤模型,隔日一次、口服200 mg/kg ERD的方式持续给药16天。对照组给予同样剂量的安慰剂。观察终点时,根据移植瘤体积、重量及蛋白变化评估ERD的体内抗肝癌活性。结果:ERD在体外以剂量和浓度依赖性的方式有效诱导HCC细胞活性减低和细胞凋亡,cleaved PARP和cleaved Caspase 3水平明显增加。ERD在体外具有显着抑制HCC细胞划痕愈合、侵袭和转移的能力。ERD显着增加了HCC细胞中EMT相关蛋白E-cadherin的表达,同时降低了N-cadherin和Vimentin的水平。另外,ERD治疗有效地抑制了裸鼠异种移植物HCC的生长,且全身毒性低、副作用低。分子机制分析表明,ERD强烈降低抗凋亡蛋白Survivin的表达,增加促凋亡蛋白Bak的水平,最终导致Caspase 3和PARP等凋亡执行蛋白的裂解激活。Survivin基因沉默显然使HCC细胞对ERD诱导的细胞凋亡作用敏感。结论:我们的研究结果表明,ERD通过靶向抑制Survivin蛋白表达,可以作为一种新型的抗HCC天然产物。
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