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目的：随着人们生活水平的提高,和社会环境的不断改变,阿尔茨海默病(Alzheimer’S disease, AD)的发病率却呈现了不断且快速上升的趋势,根据大量的医学研究资料显示,对于阿尔茨海默病至今还没有特效药物以及治疗方法。本实验是用纯化了的绿色荧光蛋白(green fluorecent protein,GFP)转基因小鼠的胚胎神经干细胞(neural stem cells, NSCs),进行分离、培养,然后移植到APP/PS1双转基因小鼠脑内的海马中。探讨神经干细胞在修复患鼠脑组织过程中的作用,从而为临床应用神经干细胞来治疗阿尔茨海默病提供理论依据。方法：(1)E14的GFP转基因小鼠内的胚胎,取其端脑,制成神经干细胞悬液进行培养,并进行免疫荧光细胞化学技术来检测所培养干细胞巢蛋白(Nestin)的表达。同时用胎牛血清来诱导神经干细胞进行分化,用MAP-2(神经元特异烯醇化酶),GFAP(胶质纤维酸性蛋白)免疫细胞化学染色,对其所分化成的神经元和星形胶质细胞进行鉴定。(2)E14的C57小鼠内的胚胎,用上述方法制成神经干细胞悬液进行培养,传至4-6代时,以每孔8×104—1×105个细胞/500μl的密度接种于24孔板内,按照复染指数(Multiplicities of infection,MOI)为0,1,5,10,15,20加入携带有GFP基因的慢病毒载体(lent iviral vector-GFP,LV/GFP)稀释液,每六孔为一滴度,共六组。2-3天后置于倒置荧光显微镜下观察其GFP的阳性表达。以流式细胞仪检测各组各组神经干细胞的GFP阳性转染率。(3)根据脑立体定位技术将含有GFP基因的神经干细胞移植到AD小鼠脑内海马中,一周后做水迷宫与旷场试验,以检测小鼠的学习与记忆能力是否有所改善。移植四周后取小鼠脑部采用荧光技术来检测移植后,神经干细胞的存活及迁移能力。结果：体外实验充分证明,从E14的胎鼠端脑内可以成功的分离培养出神经干细胞,并且此细胞中绝大多数可以表达神经干细胞的标志物——巢蛋白(Nestin);在胎牛血清分化培养基的诱导下,神经干细胞具有多方向分化的潜能,其中少数干细胞可以分化成被MAP-2表达的神经元,多数可以分化成被GFAP所表达的星形胶质细胞。神经干细胞转染GFP基因后,除MOI=0组以外,2-3天后各孔的GFP均有表达。且随着MOI值的增加而阳性表达率亦增加。MOI=0-10时,P<0.05。通过行为学检测,在学习与记忆能力上,细胞移植组的小鼠比模型组有差异(P<0.05),与对照组比较差异无显著性(P>0.05).免疫组织化学技术检测：移植后的神经干细胞不仅能够可以很好与AD小鼠的脑组织进行整合,而且可以在AD小鼠脑组织内进行迁移。结论：神经干细胞在无血清完全培养基培养下可以很好的存活,并且大量增殖。移植脑组织海马区后可以完成迁移与整合。神经干细胞对阿尔茨海默病的治疗有一定疗效。同时慢病毒可以作为将外源基因转入到神经干细胞的理想载体。