【摘 要】
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人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的催化活性亚基,hTERT基因是单拷贝基因,位于5p,长度约有40kb,包含16个外显子和15个内含子.迄今发
【出 处】
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上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学
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人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的催化活性亚基,hTERT基因是单拷贝基因,位于5p<15,33>,长度约有40kb,包含16个外显子和15个内含子.迄今发现,端粒酶活性在大部分肿瘤组织中表达,而在正常组织细胞很少表达,因此将hTERT作为肿瘤免疫治疗的抗原具有很高的研究价值.细胞毒淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocytes,CTLs)在抗肿瘤中发挥重要作用,肿瘤相关抗原(tumor associated antigen,TAA)能诱导特异的抗肿瘤T淋巴细胞反应.尽管多种蛋白已被确认可作为TAA诱导出特异的CTL,但是这些CTL往往只对一种或少数几种特定的肿瘤细胞有杀伤力.基于hTERT在肿瘤细胞中表达的普遍性,有人设计合成hTERT特异的肽(hTERT-derived peptide),并分别在鼠和人细胞中刺激产生特异的CTL,这些CTL在体外可杀伤多种肿瘤细胞.我们设计合成了三条hTERT相关的抗原肽,p572(RLFFYRKSV)、pY572(YLFFYRKSV)和pF572(FLFFYRKSV),p572是近期研究较多的一条与HLA A2.1分子低亲和力的9肽,pY572和pF572是我们根据9肽氨基酸位置特点突变合成,理论上它们与HLAA2.1分子的亲和力要高于p572.我们在实验中发现pY572和pF572的免疫原性明显高于p572,并用T2细胞作为模型在体外成功诱导出有活性的CTL.作为专职抗原递呈细胞,树突状细胞(dentritic cells,DCs)捕获外来抗原,迁移至引流淋巴结,发育成熟并递呈抗原,启动和诱导T细胞分化产生免疫反应或直接激活B细胞以及产生免疫记忆,其强大的抗原递呈以及免疫调节能力越来越引起人们的兴趣.我们采取抗原多肽负载的策略,从外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中诱导出成熟的DC细胞,再分1别将三条肽负载给DC细胞,经放射线处理后与用磁珠分离的CD8<+>细胞混合,在多种细胞因子的作用下,诱导特异性CTL的分化.如此这样再刺激两到三次,最后用LDH释放法检测CTL的细胞毒性和特异性.
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