前言 腹膜转移是进展期胃癌根治术后最常见的复发形式，其最终导致以顽固性腹水为主要特征的癌性腹膜炎，是胃癌术后患者最主要的死因。文献报道，进展期胃癌根治术后以腹膜转移形式复发者约占40-50％，这些患者大多在两年内死亡。有无腹膜转移已经成为当前影响胃癌患者预后的重要因素之一。目前认为，腹膜转移是特殊的肿瘤细胞与腹腔中的适宜环境相互作用的结果，涉及粘附、降解、移动、血管生成、免疫逃避等多方面机制；其中，粘附分子、降解酶、某些细胞因子和转移相关基因在腹膜转移进程中发挥了重要作用。此外，腹腔脱落癌细胞检查(ECC)是公认的检测腹膜转移的重要手段，但是受多种因素影响，其正确诊断率仅为40-60％。可见，探讨胃癌腹膜转移的过程和机制，完善检测或预测腹膜转移的方法，具有重要的理论和实际意义。研究表明，粘附分子CD44的表达能够明显促进细胞的迁移和粘附，可能是肿瘤细胞获得侵袭和转移能力的决定因素之一；S100A4作为一种转移相关基因，其编码蛋白能够通过影响粘附、水解、细胞移动等多个环节促进肿瘤的转移；还有学者认为，整合素β1和转化生长因子TGF-β1也在肿瘤腹膜转移进程中发挥了重要作用。关于上述四种因子在腹膜转移中作用的研究结论多来自体外实验或动物实验，目前尚未发现在胃癌患者腹腔液中检测其mRNA表达水平的文献。本研究采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR法)对胃癌患者腹腔液中CD44、整合素β1、TGF-β1和S100A4的mRNA表达进行检测，旨在探讨其表达水平与胃癌腹膜转移相关因素和病程进展的关系，及其在腹膜转移早期诊断中的意义。 实验材料 收集50例胃癌手术患者的腹腔冲洗液或腹水；其中早期胃癌5例，进展期胃癌45例。所有患者在手术前均未经化疗或放疗。 实验方法 对胃癌患者的腹腔冲洗液或腹水进行ECC检查，并采用RT－PCR法检测其中 CD44、整合素印、TGF－pl和S100A4 mmA的表达。①胃癌患者腹腔液的收集和ECC检查：在术中开腹后，于患者直肠－膀腕凹陷（女性为直肠－子宫凹陷）处置人一根导尿管，注入无菌生理盐水二皿毫升，轻轻搅拌后抽出；若有自然腹水则直接抽取。实验用量大约50毫升，将其中20毫升左右送细胞病理室进行 ECC检查；将剩余部分在低温离心机中，以 2000 Xg，离心10分钟，去上清；②细胞总RNA的提取：在上述离心后的沉渣中加人二毫升TmOL试剂，参照试剂说明书迸行NA的提取；③逆转录反应：将提取的 RNA逆转录成 CDNA；④PCR扩增：以 CDNA为模板，选择相应的引物，扩增 CD44、整合素团＊GF－pl和 S100A4的基因片段，以 p－achn作为反应的内对照；③PCR扩增产物的检测和半定量：取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，摄下并保存电泳图象；采用Ge W毗－ID软件，对电泳图象中目的基因和内对照p－achn的扩增产物条带分别进行分析；通过计算，对目的基因的表达迸行半定量。 实验结果 CM mRNA在腹腔液中的表达率为 83％N3／50人其表达水平与浆膜类型和腹膜转移有关；而且在 TNM ill＋IV期病例和 ECC阳性组的表达水平明显增高。整合素 pl mRNA的表达率为50％ ·2·＊5／50人其在腹膜转移组的表达水平高于无转移组的水平。TGF－pl mRNA的表达率为100％O0／50入其表达水平与浆膜类型。ECC检查和TNM分期有关。5100A4 mRNA的表达率也为 100％，其表达水平与’fNM分期有关，与ECC检查显著相关。所有50例样本中，表达三种mRNA的样本有45例，四种因子均表达的有23例。随着表达因子数的增加，ECC阳性率和腹膜转移率均有升高趋势，其中ECC阳性率的升高更为明显。以ECC检查作为标准诊断，计算出CD44和整合素pl mANA定性检测对诊断腹膜转移的灵敏度分别为 89．74％和 63．16％，特异度分别为 16．31％和58．60％。 讨 论 人类 CD44基因位于第 11号染色体短臂，其编码的粘附分子CD44是一种分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，是最主要的透明质酸受体。目前认为人D44基因的异常表达可能是癌细胞获得侵袭和转移能力的决定因素之一。本研究证实，腹腔液中CD44InRNA的表达水平与腹膜转移及其相关因素之间存在着密切联系人D44在腹膜转移进程中发挥了重要作用。其促进腹膜转移的机制可能是：①促迸肿瘤细胞与腹膜间皮细胞和ECM成分的粘附；②促进肿瘤细胞释放蛋白水解酶，并与水解酶协同，加速ECM的降解；③有助于肿瘤细胞逃避人体的免疫监视；④加速肿瘤细胞的迁移等。整合素 pl是整合素家族的主要亚基，可与多种 a亚基结合，成为各种ECM成分的受体，调节细胞的粘附、生长、分化及ECM的分泌等。体外实验证实，整合素pl在肿瘤细胞中的表达对腹膜转移有确切的促进作用。本研究表明，腹腔液中整合素pl mRNA的表达水平与腹膜转移有关；整合素 pl也是影响腹膜转移的重要指标之一。其作用机理包括：①介导肿瘤细胞与腹膜