【摘 要】
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白藜芦醇(resveratrol,简称Res),是一种次生代谢产物,植物内毒素,具有抗氧化、抗肿瘤、抗血小板凝聚、防止人体低密度脂蛋白(LDP)氧化、提高肌体免疫力等功效Res广泛存在于种
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白藜芦醇(resveratrol,简称Res),是一种次生代谢产物,植物内毒素,具有抗氧化、抗肿瘤、抗血小板凝聚、防止人体低密度脂蛋白(LDP)氧化、提高肌体免疫力等功效Res广泛存在于种子植物中,但是Res在植物体内的含量是非常低的,所以仅仅用传统的提取方法得到高丰度的Res非常困难,并且耗资过大.有关研究表明影响Res含量的主要因素是白藜芦醇合成酶(resveratrolsynthase,简称RS)的量,该研究试图通过基因工程的方法建立一种新的Res生产体系--毕赤酵母表达体系.为了构建白藜芦醇合成酶(RS)基因的克隆载体,用PCR技术从葡萄叶片总DNA中扩增出RS基因全长,然后将其重组到克隆载体中.通过酶切对重组质粒进行了鉴定和测序,结果表明,RS基因已经正确克隆至pUCl9中,将重组质粒转入大肠杆菌里,使RS基因能够在大肠杆菌里保存并且大量扩增,为RS基因构建表达载体表达白藜芦醇合成酶奠定了基础.将重组后得到的克隆载体用加Kozak序列的引物扩增,凝胶电泳后回收目的条带,然后将回收条带和酵母表达载体pPIC3.5K用同样的限制性内切酶切割,用T4 DNA连接酶将两者连接.经酶切鉴定RS基因已经正确地连接到pPIC3.5K上.用电激法将重组以后的酵母表达载体导入甲醇型酵母(Pichia.pasteoris)菌株GS115中,获得转化子.将转化子进行PCR筛选,得到酵母重组菌株.在以甲醇为唯一碳源的培养基上培养,进行了重组酵母菌株的诱导表达.
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