论文部分内容阅读
目的:SASH1基因(SAM- and SH3-domain containing 1)是新发现的一种候选抑癌基因,本课题研究SASH1蛋白在胃癌组织中的表达情况及构建SASH1小干扰RNA表达载体以抑制SASH1基因在GES-1细胞中的表达。方法:1、收集94例手术切除胃癌组织及15例癌旁组织,采用免疫组化方法检测SASH1蛋白表达情况,并分析SASH1表达与胃癌临床病理特征之间的关系;2、设计SASH1基因的RNAi干扰靶点,并利用psilencer 1.0-U6质粒构建2个SASH1小干扰RNA表达载体,分别命名为pSilencer-1.0-U6-SASH1-1和pSilencer-1.0-U6-SASH1-2;3、通过LipofectamineTM2000将重组质粒转染入胃粘膜上皮细胞GES-1中,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)比较重组质粒转染后GES-1细胞增殖能力的改变,并用细胞免疫化学、RT-PCR检测转染前后SASH1基因表达的变化,同时比较了转染前后GES-1细胞BCL-2基因的表达变化情况。结果:1、胃癌组织中SASH1蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织,两者差异有显著性( P=0.001);SASH1在胃癌组织中的表达与浸润深度(P=0.001)、淋巴结转移(P<0.001)、分化程度(P=0.021)及TNM分期( P=0.047)有关,而与年龄(P=0.513)和性别(P=0.720)无关;2、转染重组质粒pSilencer-1.0-U6-SASH1-1组的GES-1细胞72h、96h、120h用MTT法测得的增殖能力比对照组和pSilencer-1.0-U6-SASH1-2实验组强( P<0.05 ); 3、转染重组质粒pSilencer-1.0-U6-SASH1-1组的GES-1细胞内的SASH1基因的mRNA及蛋白表达水平下降,BCL-2基因的表达水平升高。结论:1、SASH1蛋白表达水平与胃癌临床病理特征密切相关;2、重组质粒pSilencer-1.0-U6-SASH1-1可以有效抑制GES-1细胞内的SASH1基因表达;3、应用RNAi技术抑制GES-1细胞内的SASH1基因表达后会促进GES-1细胞增殖;4、抑制GES-1细胞内的SASH1基因表达后GES-1细胞内的BCL-2表达水平升高,提示SASH1表达水平下调后可能通过BCL-2发挥一系列的生物学作用。