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目的:KAI1基因是新近发现的肿瘤转移抑制基因。本课题试图通过基因转染技术,探讨KAI1基因对肝癌MHCC97-H细胞生长及侵袭能力的影响,为肝癌后续的抗转移治疗研究奠定基础。方法:将利用亚克隆技术构建的人类KAI1全长正、反义结构基因哺乳动物真核表达质粒,通过DOTAP脂质体介导的转染技术分别转入人肝癌MHCC97-H细胞中,经聚合酶链反应(PCR)对转染基因的整合鉴定和Western blot分析的表达鉴定后,观察基因转染对细胞超微结构、KAI1蛋白表达、体外生长状况、细胞周期、集落形成能力以及体外侵袭能力等的影响。结果:(1) 电镜观察基因转染前后的细胞在大体形态、表面微绒毛、核型及分裂像等方面均未见到明显变化;但转染正义KAI1基因后细胞线粒体数量较对照组减少,转染反义KAI1基因后则细胞线粒体数量增多、体积增大,并可见髓鞘样变,粗面内质网、Golgi较发达,内质网扩张。 (2)细胞体外生长曲线及细胞周期:连续观察10天,正、反义KAI1基因转染组与对照组MHCC97-H在细胞生长曲线方面未见明显差异;用流式细胞仪分析细胞周期也无明显差别。(3)Western blot 分析和免疫细胞化学SP法染色显示,MHCC97-H细胞在转染正义基因后KAI1蛋白表达增强,相反,转染反义基因后KAI1蛋白表达减弱。KAI1蛋白主要表达于细胞浆。(4)平板培养2周后,细胞集落形成数与对照组MHCC97-H(38.50±1.91)比较,转染KAI1正义基因后(36.25±3.30)下降不显著(P>0.05),而转染KAI1反义基因后(132.50±12.87)则显著增多(P<0.01)。(5)体外侵袭实验发现,转染KAI1正义基因后的穿膜细胞数(59.67±3.51)较对照组MHCC97-H细胞(92.67±1.53)明显减少(P<0.01),而转染KAI1反义基因后的穿膜细胞数(188.00±4.51)则较对照组明显增加(P<0.01)。结论:(1)构建了KAI1正、反义基因哺乳动物真核表达质粒,并分别成功转染给高转移潜能的人肝癌MHCC97-H细胞。(2)首次发现转染KAI1基因可导致肝癌MHCC97-H细胞一些细胞器发生数量和形态学方面的变化。(3)KAI1基因对肝癌MHCC97-H细胞的体外生长曲线及细胞周期无明显影响。(4)反义KAI1基因可使MHCC97-H细胞的克隆形成能力增强,但正义KAI1基因使MHCC97-H细胞的克隆形成能力下降的作用则不显著。(5)KAI1基因上调表达能使MHCC97-H细胞的侵袭能力降低。提示上调KAI1基因表达可能是肝癌抗转移研究的一个方向。