论文部分内容阅读
类拟盘多毛孢真菌(Pestalotiopsis-like fungi)是危害蓝莓的重要致病菌之一。随着人们对功能性水果越来越关注,蓝莓产业发展越来越迅速,目前在我国已有27个省份开展了规模化种植,由类拟盘多毛孢病菌引起的蓝莓枝枯及叶斑病发生越来越普遍,严重影响了蓝莓产业的经济效益。本研究在课题组前期工作基础上,将前期研究未被鉴定出来,分离自蓝莓的类拟盘多毛孢菌株作为研究对象,将其重新与新增的模式菌株进行了基于三基因联合建树的系统发育分析,结合传统形态学鉴定,发现1个危害蓝莓的拟盘多毛孢新纪录种。在此基础上,筛选了可用于后续菌系水平分析的ISSR引物,测定了5种杀菌剂对课题组鉴定的3个拟盘多毛孢新纪录种的抑菌效果及差异,评价了8个蓝莓主栽品种对引起枝枯症状拟盘多毛孢菌的抗病性水平,研究取得如下成果:1.鉴定出一个危害蓝莓的拟盘多毛孢新纪录种Pestalotiopsis kenyana本研究中的40株供试菌均来自课题组前期未被鉴定出来的蓝莓类拟盘多毛孢菌。本研究所使用的模式菌株新增情况:Pestalotiopsis属新增8个种,Pseudopestalotiopsis属新增5个种,Neopestalotiopsis属新增2个种。通过ITS、β-tubulin和tef1等三基因联合建立的系统发育分析,发现以YN06F为代表的9株供试菌与模式菌株归为一支。而其他31株供试菌仍未被鉴定出来,有待后续进一步研究。进一步对上述系统发育分析筛选出来的候选新纪录种进行了形态学的鉴定。研究发现,其菌落为白色,生长后期菌落表面生成黑色稀疏的子实体,释放黑色墨滴状的分生孢子角。分生孢子大小为20.728.8μm×4.77.2μm,顶端附属丝23根,长度为10.320.5μm,基部附属丝长度为3.57.0μm,中间三色细胞长为13.218.0μm。该菌的形态特征与模式种Pestalotiopsis kenyana描述一致。结合形态学鉴定与系统发育分析,该危害蓝莓的拟盘多毛孢新纪录种被鉴定为P.kenyana。2.筛选出3条可用于类拟盘多毛孢菌分析的ISSR引物依据本研究中供试菌株与模式菌株的三基因系统发育树的分支情况,从每个分支中挑选代表菌株,制成拟盘多毛孢菌株的差异DNA混合池。在此基础上对哥伦比亚大学公布的引物进行筛选,由此筛选出了3条引物(810、864、891)可用于后续类拟盘多毛孢真菌菌系水平多样性研究。3.不同杀菌剂对蓝莓类拟盘多毛孢病菌的抑菌效果测定本研究以新纪录种P.kenyana和前期课题组鉴定的其他2个新纪录种P.trachicarpicola、N.chrysea作为靶标对象,测定了5种杀菌剂(咯菌腈、双胍三辛烷基苯磺酸盐、吡唑醚菌酯、甲基硫菌灵和异菌脲)对3个靶标菌的室内抑制效果。结果表明:5种杀菌剂对3个靶标菌均具有较好的抑制效果,最大EC50值为3.0883μg/ml(异菌脲),其中咯菌腈的抑菌效果最好,其EC50值不超过0.0561μg/ml。供试3个靶标菌对测定的5种杀菌剂的敏感程度基本一致,生产中防控时不用区分对待。4.不同蓝莓品种对类拟盘多毛孢病菌的抗病性评价本研究以新纪录种P.kenyana和前期课题组发现的其他2株茎部强致病力菌株N.chrysea和Neopestalotiopsis sp.(SCCD01C-b)为靶标病原菌,评价了8个蓝莓主栽品种:杜克、蓝丰、埃利奥特、布里吉塔、奥尼尔、夏普蓝、莱格西和密斯提对3个靶标菌的抗病性水平。研究结果表明:不同蓝莓品种对不同靶标菌的抗病程度不同。供试8个品种均对P.kenyana抗病性较强。供试8个品种中有7个品种对N.chrysea抗病性较强,有1个品种(蓝丰)的抗病性较弱,接种7 d时病斑长度扩展至26.7 mm。供试8个品种中有6个品种对Neopestalotiopsis sp.(SCCD01Cb)抗病程度较强,有2个品种(奥尼尔、杜克)抗病性较弱,奥尼尔接种7 d时病斑大小达89.5 mm,杜克接种7 d时病斑拓展至56.1 mm。