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目的1、建立Hybrid神经移位组(“迷走神经-膈神经端侧吻合”+“喉返神经-膈神经端端吻合”)、膈神经原位吻合组、假手术组分别为实验组(A组)、对照组(B组)及空白对照组(C组),各组内再根据模型建立时程将3个月、6个月各组实验动物分别分为1、2两个亚组。2、使用组织化学方法研究神经移位后实验组、对照组及空白对照组各组吻合口远端膈神经的组织学变化及差异。3、探讨研究对比各组大鼠膈肌动作诱发电位(MEP)特点及差异。4、使用组织化学方法研究神经移位后实验组、对照组及空白对照组膈肌的组织学变化及差异。方法1、100g幼年雄性SD大鼠30只随机均等分为A、B、C三组,再根据时程长短随机均等分为1、2亚组。A组于颈根部分别显露相应侧膈神经、迷走神经、喉返神经,于左侧迷走神经外膜开窗,将右侧膈神经起始处切断并无张力端侧吻合于迷走神经外膜开窗处;左侧膈神经远端与相应侧离断的喉返神经近端进行端端吻合,喉返神经远端丝线结扎包埋于附近肌肉中;B组于颈根部显露膈神经切断并原位缝合;C组作为空白对照组(其中A、B两组于术中发现副膈神经者大鼠予以无副膈神经大鼠更换)。2、神经吻合口远端5mm处取材。10%多聚甲醛固定,切片,甲苯胺蓝染色。利用IMS细胞图像分析系统对膈神经远端有髓神经纤维计数,将实验组与空白对照组膈神经相对应有髓神经纤维进行比较。3、用意大利Phasis肌电仪测试。刺激电极置于神经吻合口的近端5mm处进行刺激,同芯针电极为记录电极,插入膈肌腋前线第9肋骨下缘处。刺激神经吻合口近端,记录其诱发电位,并得出最大诱发电位振幅及潜伏期。4、膈肌动作诱发电位测定完成后,完整取出大鼠膈肌,于双侧膈肌肌瓣中心切取2mm宽肌条,常规石蜡切片,HE染色。用IMS细胞图像分析系统对膈肌肌纤维截面积进行测量,将实验组与空白对照组肌细胞横截面积进行比较。结果1、A组内两个亚组在相同时程左、右两侧膈神经有髓神经纤维计数存在明显差异(P<0.05),6个月时程膈神经有髓神经纤维恢复优于3个月组(P<0.05);A组膈神经有髓神经纤维恢复与B组存在差异(P<0.05),但两组仍与空白对照组存在明显差异(P<0.05)。2、A组内两个亚组在6个月时左、右两侧膈肌MEP无明显差异(P>0.05),而在三个月时左侧膈肌MEP潜伏期明显长于右侧膈肌(P<0.05),6个月时程膈肌MEP优于3个月组(P<0.05);A组膈肌MEP仍与B组存在明显差异(P<0.05)。3、A组内两个亚组在相同时程左、右两侧膈肌肌纤维截面积无明显差异(P>0.05),6个月时程膈肌肌纤维截面积恢复优于3个月组(P<0.05);A组膈肌肌纤维截面积与B组无明显差异(P>0.05),但两组与空白对照组存在明显差异(P<0.05)。结论1、A组两侧吻合口远端膈神经有髓神经纤维存在差异,说明端侧吻合尚不能达到端端吻合的效果,但均与原位吻合组、空白对照组存在差距。2、根据MEP结果,端侧吻合修复膈神经在3个月时与端端吻合存在差距,但在6个月时则差距不明显;但各组膈肌MEP在术后6个月均优于术后3个月。3、A、B两组神经缝接后6个月亚组大鼠膈肌肌纤维截面积均较3个月有所改善,但与空白对照组膈肌肌纤维截面积存在明显差距。迷走神经-膈神经端侧吻合侧、喉返神经-膈神经端端吻合侧在膈肌肌纤维截面积比较无明显差异;Hybrid神经移位术组(A组)在膈肌肌纤维截面积与膈神经原位吻合组(B组)相仿,但仍低于空白对照组(C组)。4、初步研究表明Hybrid移位术对膈肌再支配效果尚满意,但恢复膈神经的正常支配效果尚需进一步深入研究如何延缓膈肌在再支配前的萎缩。