川贝母有效成分提取工艺及质量标准的研究

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贝母Frritillaira为百合科Liliaceae贝母属Fritillaria L.植物的干燥鳞茎,是常见的中药材之一,收录于《中国药典》2005版一部。贝母在我国有悠久的使用历史,有清热润肺,化痰止咳之功效,主治肺热燥咳、咯痰带血、痰多胸闷等症。本论文首先研究了川贝母中有效成分生物碱和皂苷的最佳提取工艺。以贝母总生物碱为指标,采用单因素考察了药材粒度,再用正交试验考察了提取时间、提取次数、料液比对贝母类药材总生物碱提取的影响,最终确定最佳提取工艺为:时间24小时、料液比40ml、提取次数2次;采用超临界CO2流体提取技术提取川贝母游离生物碱,选取萃取压力、萃取温度、萃取时间和夹带剂用量作为考察条件进行单因素试验,在单因素试验的基础上,再通过正交试验。实验结果显示CO2萃取川贝母游离生物碱的最佳萃取条件为:萃取压力20MPa,乙醇用量300ml,萃取时间2h,萃取温度45℃;采用乙醇(甲醇)索式法、乙醚(丙酮)沉淀法提取贝母总皂苷。选取药材粒度、提取时间、甲醇浓度三因素,通过正交实验确定了提取总皂苷最佳工艺,结果显示最佳提取条件为提取时间为8小时,粒度为100目,甲醇浓度100%。本论文还对川贝母的质量标准进行了探讨,分别测定了贝母类药材的微量元素,采用二极管阵列-高效液相色谱的方法初步构建贝母类药材的指纹图谱,并利用分子生物学标记技术探索了川贝母的质量标准。实验中利用火焰(石墨炉)原子吸收分光光度仪和定碳、定硫仪对10种不同产地、品种的贝母中16种微量元素进行了测定。以测定结果含量为指标,提取特征因子,再利用特征因子作聚类分析。结果表明微量元素,与中药质量标准有相关性;实验还对8种不同品种、产地的贝母作了高效液相色谱分析,通过检测其主要成分生物碱的含量来评价其质量。以贝母素甲为标准品,采用外标法,并对8种贝母药材进行柱前衍生化处理,检测贝母中生物碱并做出分析。本研究初步建立了川贝母的指纹图谱,为川贝母的品种鉴定和质量评价提供一定的参考;采用用随机片段多态性DNA(RAPD)的方法扩增了8个贝母样品总DNA,根据电泳后获得的DNA片段图谱,在同一位置上,重复性的DNA扩增条带“有”记为“1”,“没有”记为“0”,然后在Rapdistance软件上进行分析,并进行聚类。得到的聚类图基本上反映了这些贝母的亲缘关系,由此表明,RAPD的方法可进行川贝母药材的评价与鉴定。
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