早期X射线外照射对经皮腔内血管成形术后血管再狭窄的影响

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目的1.评价不同剂量X射线外照射对兔髂动脉PTA术后动脉再狭窄的干预作用。2.通过检测不同剂量X射线PTA术后再狭窄模型髂动脉的Cyt c、PCNA、CD34、-SMA的表达,进一步探讨X射线外照射防治PTA后再狭窄的机制。方法1.动物来源与分组:健康成年新西兰大白兔24只,体重2.5±0.5kg,随机分为空白对照组(4只)和实验组(20只),空白对照组喂普通颗粒饲料,实验组喂高脂饲料。实验组又随机分为5个亚组每组4只,第1组为非放射对照组(0Gy),第2组至第5组为放射治疗组,分别为3Gy组,6Gy组,9Gy组,12Gy组。实验组喂高脂饲料后4周行髂动脉内膜球囊损伤手术,术后继续高脂饲料喂养。2.再狭窄模型的建立:实验组高脂饲料喂养4周后行球囊髂动脉内膜损伤手术。麻醉后常规消毒,股动脉作切口插入3F球囊导管8cm,充盈球囊以扩张髂动脉,扩张长度7cm。3Gy组,6Gy组,9Gy组,12Gy组术后第1、2天分别接受3Gy,6Gy,9Gy,12Gy照射。3.术后4周取材,组织行HE染色,观察血管病理改变,测量内膜面积、中膜面积、狭窄度;免疫组化染色检测-SMA、cd34、PCNA、Cyt c表达量;Western blot检测Cyt c表达量。结果1.病理改变空白对照组大白兔髂动脉内膜、中膜、外膜分界清楚,内膜光滑,内皮细胞扁平,无脱落。中膜由平滑肌细胞和环形的弹力纤维组成。外膜由较薄的结缔组织组成。血管壁厚度均匀一致。0Gy组:管腔明显狭窄,血管内膜明显增厚,且血管壁厚度不均匀,内膜中大量平滑肌细胞增生且平滑肌细胞排列紊乱、极不规则。3Gy组-12Gy组:管腔有不同程度狭窄,内膜不同程度增厚,内膜有少量平滑肌细胞增生,但内膜增厚程度及管腔狭窄程度明显轻于0Gy组。2. X射线外照射对血管狭窄程度的影响内膜面积:3Gy组,6Gy组,9Gy组,12Gy组与0Gy组相比,内膜面积明显减少(p<0.05),3Gy组,6Gy组,9Gy,12Gy组间差异有统计学意义(p<0.05),随着放射剂量增加,内膜面积呈减少趋势。空白对照组内膜面积明显小于0Gy组,3Gy组,6Gy组,9Gy组(p<0.05),空白对照组与12Gy组内膜面积无明显差异(p>0.05)。中膜面积:3Gy组,6Gy组,9Gy组,12Gy组与0Gy组相比中膜面积明显减少(p<0.05),空白对照组中膜面积明显小于0Gy组(p<0.05)。狭窄度:6Gy组,9Gy组,12Gy组狭窄程度明显低于0Gy组(p<0.05),9Gy组,12Gy组狭窄度明显低于明显低于3Gy组(p<0.05),12Gy组狭窄度明显低于9Gy组(p<0.05)。空白对照组与0G y组,3Gy组,6Gy,9Gy组相比内膜面积明显减少(p<0.05),空白对照组与12Gy组间无统计学差异(p>0.05)。3.免疫组化-SMA阳性表达细胞细胞浆呈棕黄色,主要表达在血管内膜和中膜。3Gy组,6Gy组,9Gy组,12Gy组-SMA表达量明显低于0Gy组(p<0.05),12Gy组-SMA表达量明显低于3Gy组,6Gy组,9Gy组(p<0.05)。12Gy组-SMA表达量与空白对照组无差异(p>0.05),0Gy组,3Gy组,6Gy组,9Gy组-SMA表达量高于空白对照组(p<0.05)。CD34阳性表达细胞细胞浆呈棕黄色,主要表达在血管内膜内皮细胞。各组间差异无统计学意义(p>0.05)。Cyt c阳性表达细胞细胞浆呈棕黄色,在血管内膜、中膜、外膜均可见,以内膜、中膜表达较多。9Gy组,12Gy组Cyt c表达量明显高于0Gy组(p<0.05),也明显高于3Gy组(p<0.05)。空白对照组Cytc表达量与0Gy组无差异(p>0.05)。3Gy组,6Gy组,9Gy组,12Gy组Cytc表达量明显高于空白对照组(p<0.05)。PCNA阳性表达细胞细胞核呈棕色。PCNA主要表达在实验组血管增生的内膜和中膜。6Gy组,9Gy组,12Gy组PCNA表达量明显低于0Gy组(p<0.05),也明显低于3Gy组(p<0.05)。空白对照组PCNA表达量明显低于0Gy组,3Gy组,6Gy组,9Gy组,12Gy组(p<0.05)。4. western blot测定Cyt c表达量3Gy组,6Gy组,9Gy,12Gy组Cyt c表达量明显高于0Gy组(p<0.05),6Gy组,9Gy组,12Gy组Cyt c表达量明显高于3Gy组(p<0.05)。空白对照组Cyt c表达量与0Gy组无差异(p>0.05)。3Gy组,6Gy组,9Gy组,12Gy组Cyt c表达量明显高于空白对照组(p<0.05)。结论1.6-24Gy的放射性能使球囊损伤血管的内膜面积、中膜面积、狭窄程度、PCNA及-SMA表达量减少,Cytc表达量增加,说明6-24Gy的早期X射线外放射能有效抑制球囊损伤血管平滑肌细胞增殖,诱导增生的内膜和中膜的细胞凋亡,有效防治PTA术后再狭窄,并且24Gy的效果更为肯定。2.6-24Gy X射线未导致CD34表达量降低,说明6-24Gy的放射治疗没有明显导致内皮细胞减少,不会破坏血管内皮完整性。3.6-24Gy X射线外照射可使使线粒体释放Cyt c增加,可能通过线粒体途径诱导血管内膜和中膜增生的细胞凋亡,从而防治PTA术后再狭窄。并且18-24Gy的放射剂量致Cytc释放的作用更为明显。
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