背景和目的:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,As）是多数心血管疾病的共同病理基础,严重危害人类健康。巨噬细胞渗入血管内膜下并吞噬大量脂质形成泡沫细胞,是动脉粥样硬化病变的重要标志。ATP结合盒转运蛋白A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）是一种重要的膜蛋白,在巨噬细胞中高度表达,对调控细胞胆固醇稳态起着关键性作用。ABCA1表达增加促进胆固醇流出至无脂载脂蛋白A1（apolipoprotein A1,apo A-I）以产生高密度脂蛋白（high-density lipoprotein,HDL）,是胆固醇逆向转运（reverse cholesterol transport,RCT）的第一步。RCT是抑制泡沫细胞的形成和抗动脉粥样硬化的发展的重要过程。因此,深入理解ABCA1与其调节因素之间的关系对动脉粥样硬化性心血管疾病的防治非常重要。骨膜素（Periostin）是一种分泌性基质细胞蛋白,与心血管疾病密切相关。有研究显示敲除骨膜素能显著抑制动脉粥样硬化的发展,提示骨膜素具有促动脉粥样硬化作用。然而,骨膜素调节动脉粥样硬化发展和进展的潜在分子机制尚未完全明确。此外,骨膜素在巨噬细胞胆固醇流出中的作用仍不清楚。本研究的目的是研究骨膜素对脂质代谢的影响及其潜在的分子机制,从而进一步揭示骨膜素的促动脉粥样硬化作用。我们的研究有望揭示骨膜素加重动脉粥样硬化的分子机制,并为动脉粥样硬化性心血管疾病提供新的治疗靶点。方法:用过表达骨膜素（LV-periostin）的慢病毒载体、LV-NC（空载体）或PBS处理THP-1源性的巨噬细胞。应用蛋白质印迹和实时定量PCR（q RT-PCR）来检测ABCA1表达。NBD-标记的胆固醇用于测量胆固醇流出的能力。通过油红O染色和高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）分别评估脂滴积累和细胞内胆固醇含量。通过蛋白质印迹检测β-catenin、磷酸化-β-catenin（Ser675）和磷酸化-β-catenin（Thr41/Ser45）表达。用Wnt/β-catenin信号通路激动剂SKL2001处理细胞后,通过蛋白质印迹和q RT-PCR检测ABCA1的表达。过表达骨膜素后,通过蛋白质印迹和q RT-PCR检测骨膜素对盘状结构域受体（discoidin domain receptor 1,DDR1）表达的影响。用DDR1 si RNA处理细胞,Western Blot检测干扰效率及ABCA1和β-catenin的表达。通过尾静脉向apo E-/-小鼠注射LV-periostin。油红O和苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色用于评估动脉粥样硬化斑块内的面积和脂质含量。通过蛋白质印迹和q RT-PCR检测主动脉中ABCA1和DDR1的表达。采用小鼠血脂检测试剂盒测量apo E-/-小鼠的血浆甘油三酯（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein-cholesterol,HDL-C）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、和低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平。结果:骨膜素显著降低THP1源性泡沫细胞中的ABCA1表达、减弱ABCA1的荧光信号。油红O染色和高效液相色谱仪分析发现,骨膜素促进巨噬细胞脂质蓄积、增加细胞内胆固醇含量。骨膜素减少胆固醇流出到apo A-I,而不影响胆固醇流出到HDL。进一步研究发现,骨膜素通过减少p-β-catenin（Ser675）的水平抑制巨噬细胞β-catenin的核转位。此外,β-catenin激动剂对WNT/β-catenin信号通路的激活拮抗了骨膜素诱导的ABCA1表达下调。骨膜素可促进THP-1源性巨噬细胞中DDR1的表达。DDR1的敲低阻止了骨膜素对ABCA1表达和β-catenin核转位的影响。体内实验表明骨膜素的过表达显著增加了主动脉DDR1表达,下调ABCA1表达,并且明显减少了apo E-/-小鼠的血浆HDL-C水平,促进动脉粥样硬化斑块的形成。小结:Periostin通过DDR1/WNT/β-catenin途径抑制泡沫细胞ABCA1的表达和胆固醇流出。Periostin上调apo E-/-小鼠主动脉DDR1的表达、降低ABCA1的表达,增加动脉粥样硬化斑块面积。