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目的皮肤在受到创伤后瘢痕修复或再生修复都是一个精细而复杂的过程,而这-过程中都需要血管来提供大量的能量和营养物质,以及运送各种因子等,这样皮肤创伤局部的血供及其重要,那么作为血管生成抑制剂的血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1, TSP-1)可能起重要作用。研究发现TSP-1在皮肤创伤愈合的早期和在鼠胚胎皮肤创伤无瘢痕愈合表达增加,并且在兔耳增生性瘢痕中注射含有TSP-1的腺病毒后瘢痕软化,可见TSP-1调控皮肤创伤愈合及瘢痕形成,然而,TSP-1对皮肤创面的再生和瘢痕形成作用的研究结果存在相互矛盾之处,而且,其在皮肤创面的愈合过程中的动态表达及其具体作用及作用机制尚不明确。本研究的目的是检测TSP-1在皮肤创伤的再生和瘢痕形成过程中的表达,比较皮肤创伤愈合的各时间段表达的差异,以及观察局部使用TSP-1对创面愈合及瘢痕形成的影响。方法50只日本大耳白(2.0-2.5kg)分笼适应性饲养7天,以相同的性别及体重配对并分为两组,各25只,分别为TSP-]组、TSP-1抗体组。适应性饲养后,5%硫化钠兔耳腹侧脱毛,3天后于两侧兔耳腹侧造耳根到耳尖由深到浅的楔形创面模型(创面大小10.0mm × 10.0mm)。TSP-1组和TSP-1抗体组在造模当天用30G针头左耳创缘四周注射TSP-10.1ml (5.0μg/m)和TSP-1抗体0.1ml (20.0μg/ml),隔日注射一次,至创面上皮化,右耳予等量生理盐水(为对照组,NS组),处理方法同前,直至创面上皮化。创面以无菌敷料包扎并卷耳固定,伤后每天观察创面愈合情况,分别于伤后第0天、4天、8天、12天和30天观察并记录兔耳腹侧创面愈合及瘢痕形成情况,每个时间点每个组取5只兔在距兔耳耳根及耳尖各侧的创缘外1.0mm处及另外两垂直创缘内侧1.0mm作平行创缘标记,沿标记线取材料,创面材料大小12.0mm × 8.0mm,深及整个软骨层。组织石蜡包埋,切片后行HE染色及免疫组化染色,并检测TSP-1和Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达量。创面由浅到深每1.0mm分成一段,以及取材时两侧留出的深浅各1.0mm的空白对照片段共12段,用Image-Pro-plus 6.0软件检测各创面组织5个视野TSP-1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的平均光密度值。SPSS19.0处理分析测得的平均光密度值数据进行统计并算出平均数,结果用“算术平均值±标准差”表示。方差齐,均数比较用t检验,方差不齐时用秩和检验,p<0.05认为两组数据间差异有统计学意义。比较正常情况下创面再生修复及瘢痕形成不同阶段以及创面深浅不同部位的TSP-1以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达量的变化,以及使用TSP-1和TSP-1抗体干预创面后,创面深浅不同部位Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达差异。结果1.兔耳创面浅侧(即距离创面浅侧边缘3.0mm宽的创面)在伤后第8天左右血痂掉落并创面上皮化,再生修复,创伤后第30天,浅侧创面皮肤平坦,与周围正常皮肤色接近；而深侧创面(即距创面深侧边缘3.0mm宽创面)于创伤后第12天血痂部分掉落,开始上皮化,创伤后第30天,深侧创面皮肤色暗红,中央明显突出皮肤表面,触之较韧,为瘢痕形成。2.TSP-1组创面愈合较NS组创面上皮化、血痂脱落、以及创面闭合即愈合更快,创面更平坦,TSP-1组浅侧创面上皮化开始提前到伤后第8天,NS组浅侧创面第9天开始上皮化,TSP-1组较NS组浅侧创面色泽更接近正常皮肤,深侧创面色泽更淡,且瘢痕更平更软；TSP-1抗体组创面愈合延迟,创面愈合的更慢,浅侧创面的及深侧创面在伤后前期有大量肉芽组织,浅侧创面上皮化延迟,深侧形成的瘢痕质韧,且明显突出皮肤表面。3.NS组深侧创面TSP-1在创伤后第4天表达开始增加,创伤后第8天达到高峰,第12天已经开始下降,创伤后第30天基本降至正常,但仍高于正常,浅侧创面TSP-1在第4天达到高峰,第12天降至正常。4.TSP-1组、NS组及TSP-1抗体组的创面Ⅰ型胶原蛋白在各时间点上深侧创面均较浅侧创面表达量高(P<0.05),而Ⅲ型胶原蛋白的表达量在各时间点上深侧创面均较浅侧创面表达量低(P<0.05)。5.TSP-1组浅侧创面Ⅰ型胶原蛋白的表达量在伤后第4天达到高峰,之后开始下降,且浅侧Ⅰ型胶原蛋白的表达量各时间点均较TSP-1抗体组及NS组浅侧创面表达量高(P<0.05)；TSP-1组深侧创面的Ⅰ型胶原蛋白伤后表达量持续增加,各时间点的表达量比NS组及TSP-1抗体组高(P<0.05)；TSP-1组浅侧和深侧Ⅲ型胶原蛋白表达量均较NS组及TSP-1抗体组表达量高,TSP-1组浅侧创面Ⅲ型胶原蛋白在创面持续增加,深侧创面Ⅲ型胶原蛋白的表达高峰在第8天,以后持续降低(P<0.05)；6.TSP-1抗体组浅侧和深侧创面Ⅰ型胶原蛋白在第4天、第8天表达量增加(P<0.05),但不明显,在第12天大量增加,浅侧创面创伤后第30天降至正常,深侧表达量在第30天达最大,各时间点表达量均低于TSP-1组及NS组(P<0.05),TSP-1抗体组浅侧创面Ⅲ型胶原蛋白表达在创伤后持续增加,但各时间点均低于TSP-1及NS组(P<0.05),TSP-1抗体组深侧创面Ⅲ型胶原蛋白在第12天增加到峰值,第30天降至正常,各时间点表达量均较TSP-1和NS表达量低(P<0.05)。7.TSP-1组创面深侧和浅侧创面在创伤后各时间点的Ⅲ/Ⅰ型胶原蛋白的比例都比TSP-1抗体组以及NS组的高(P<0.05),且各组浅侧创面的Ⅲ/Ⅰ型胶原蛋白的比例都比深侧创面的高(P<0.05)。结论1.兔耳皮肤由深到浅的楔形创面实现了创面再生与瘢痕愈合的一体化。浅侧创面无瘢痕再生修复,而深侧创面形成瘢痕。2.TSP-1促进Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达,且增高了Ⅲ/Ⅰ型胶原蛋白的比例。3.TSP-1的注射可以加快兔耳浅侧创面的上皮化及整个创面的愈合,抑制兔耳深侧创面瘢痕的形成。