目的:构建PET30a(+)HPV16 E7，PET30a(+)HPV6 E7，PET30a(+)HPV11 E7的原核表达载体，并对PET30a(+)HPV16 E7进行表达纯化及理化性质的检测。为HPV体外检测试剂的研制提供相应的技术平台。 方法:收集人病变子宫颈组织标本，提取基因组，根据已知的基因序列设计引物，然后经PCR扩增从中筛选出16型、6型和11型HPV阳性的标本。回收HPV16 E7，HPV6E7,HPV11 E7的基因片段。构建PET30a(+)HPV16 E7，PET30a(+)HPV6 E7，PET30a(+)HPV11 E7的原核表达重组质粒。用PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列测定对重组质粒DNA进行鉴定，将序列正确的重组质粒转入工程菌E. coli BL21(DE 3)进行诱导以表达相应蛋白。通过调节IPTG诱导浓度及诱导表达的时间以优化表达条件。使用AKTK纯化设备，通过硫酸铵沉淀、阴离子交换和带组氨酸标记的亲和层析等方法对重组蛋白HPV16E7进行了纯化、回收重组HPV16 E7蛋白。Lowry法测定重组融合蛋白的浓度。用紫外分光光度计对重组融合蛋白进行紫外全波长扫描。SDS-PAGE电泳及Westem blot检测鉴定表达蛋白的分子量及特异性。 结果: PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的目的基因，其DNA大小、方向、插入位点和阅读框架均正确；HPV16 E7，HPV6E7蛋白得到高效原核表达，其中HPV16 E7在37℃，0.8mM IPTG的条件下主要以胞内可溶性表达。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换和组氨酸标记的亲和层析等方法对重组蛋白HPV16E7进行了纯化，得到纯化的目的蛋白。理化特性的研究结果显示：带有6个组氨酸标签的HPV16 E7蛋白的表观分子量大小为20KD，紫外吸收扫描图谱显示在280nm处有最大吸收峰。Lowry法测定纯化后的含his标签的HPV16E7重组蛋白浓度为0.89mg/ml。经Westem Blot检测表明HPV16 E7蛋白有良好的免疫原性，带有六个组氨酸标签的HPV11E7蛋白和HPV6 E7蛋白的表观分子量大小为16KD。 结论: pET30a(+)16 E7、pET30a(+)GPV11 E7和pET30a(+)HPV6 E7重组原核表达载体构建成功,HPV16 E7、HPV 11E7和HPV 6E7获得高效原核表达。得到纯化的HPV16E7目的蛋白。为进一步研制HPV体外检测试剂奠定了基础。