目的:在原代神经细胞中观察自噬对腺病毒介导表达的Htt-552aa片段代谢的影响,以及不同日龄原代神经细胞中自噬水平的改变及其对Htt代谢的影响。方法:用携带Htt-552aa片段的腺病毒载体感染小鼠大脑皮层原代神经细胞建立亨廷顿舞蹈病细胞模型,采用Western blot法和免疫组化法检测3-MA与雷帕霉素对原代神经细胞Beclin1和LC3表达水平及其对Htt代谢水平的影响;免疫组化观察表达htt的模型神经细胞Beclin1、LC3、Cathepsin B、Cathepsin L水平及分布的变化;以Western blot法观察不同日龄神经细胞自噬水平的改变及其对htt代谢的影响。结果:1.腺病毒介导的野生型htt-552aa (htt-552aa)和突变htt-552aa (mhtt-552aa)在原代神经细胞能成功表达,有聚集体形成。2.自噬抑制剂3-MA能抑制自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达水平,增加Htt在胞内蓄积;自噬激活剂雷帕霉素增强自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达水平,减少胞内Htt蓄积。3.在Htt-552aa表达的神经细胞中,自噬/溶酶体系统相关蛋白表达发生改变:htt-552aa和mhtt-552aa都使得Beclin1与LC3分布有改变。htt-552aa明显改变了cathepsin B的分布,但mhtt-552aa似乎抑制了cathepsin B的表达。cathepsin L的表达水平在htt-552aa表达的神经细胞中高于mhtt-552aa表达的神经细胞。提示mhtt-552aa可能抑制了溶酶体酶的表达。4.随日龄的不同,自噬先增强,在第7天达到峰值,之后降低;7日龄神经细胞内Htt水平低于13日龄神经细胞Htt水平。结论:1.与PC12细胞不同,htt-552aa能在原代神经细胞中形成聚合体,mhtt-552aa尤其明显。聚集体主要出现在突起末端。2.自噬可能是Htt代谢的主要方式之一。3.mhtt蛋白抑制了溶酶体酶的表达。4.自噬水平较高日龄的原代神经细胞较自身自噬水平较低的神经细胞对htt代谢能力较强,说明神经细胞对htt代谢的能力与细胞自身自噬水平相关。进一步证明了自噬可能是Htt代谢的主要方式之一。