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文章从以下三部分就CD4+CD25+调节性T细胞在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化病程中的作用进行了综述。 第一部分 CD4+CD25+调节性T细胞在小鼠肺纤维化病程中的变化 目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells, Tregs)的变化与小鼠肺纤维化病程的关系。 方法:气管内灌注BLM制备PF模型,于造模后3、7、14、21和28天处死,采用HE和Masson染色检测肺组织改变和胶原含量评价肺病变程度;采用ELISA法检测外周血、肺泡灌洗液、脾和胸腺中IFN-γ和TGF-β1的含量评价PF病程中Th1/Th2反应;采用细胞流式检测外周血和脾中CD4+CD25+Tregs比例的变化。 结果:①BLM组小鼠肺组织,3、7天炎性细胞浸润为主,14天除炎性细胞浸润外胶原开始沉积;21天胶原沉积增多;28天胶原大量堆积。HYP含量21和28天明显增高。②BLM组小鼠血浆中IFN-γ含量3～7天时明显增高,14～28逐渐降低;TGF-β1含量3天时明显增高,7～14天时降低,21～28天时明显升高;Th指数3～14天时以Th1增高为主,21～28天时以Th2增高为主。③BLM组小鼠肺泡灌洗液中IFN-γ含量7天时升高,随后逐渐降低;TGF-β1含量7～21天时均升高,28天时略呈下降趋势;Th指数均以Th2增高为主。④BLM组小鼠7天时,脾和胸腺 Th指数分别以 Th2和Th1增高为主。⑤BLM组小鼠外周血中CD4+CD25+Tregs,3天时高于NS组,7～14天时呈逐渐下降趋势,21、28天又明显上升;脾中CD4+CD25+Tregs,3～14天时逐渐上升,14天时最高,21、28天下降,但始终高于NS组。 小结:①BLM诱导小鼠PF病程中,3～7天处于急性炎症期,14～21天处于炎症和纤维化交界期,21～28天处于纤维化期。②外周血在急性炎症期Th1反应占优势,炎症和纤维化交界期由Th1向Th2反应为主转化,纤维化期以Th2反应为主;肺泡灌洗液在整个病程中Th2反应占优势;脾和胸腺在炎症期分别以 Th2和Th1反应为主。③外周血中CD4+CD25+Tregs比例在整个病程中都高于NS组,急性炎症期其升高幅度逐渐减小,纤维化期其升高幅度增大;脾中Tregs比例在急性炎症期升高,纤维化期稍降低。④CD4+CD25+Tregs与BLM诱导小鼠PF病程具有相关性,有可能通过调节Th1/Th2反应或直接作用于肺成纤维细胞来影响PF形成。 第二部分来源于肺纤维化小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞对Th1/Th2极化的影响 目的:探讨来源于肺纤维化小鼠的外周血淋巴细胞(Peripheral blood lymphocytes, PBL)和CD4+CD25+Tregs对正常脾淋巴细胞(splenic lymphocytes, SPL)Th1/Th2极化的影响。 方法:小鼠气管内灌注 BLM14天后,采集外周血,经密度梯度离心法分离出PBL,作为刺激细胞;或用流式细胞分选仪直接从PBL中分选出CD4+CD25+Tregs和非Treg淋巴细胞,作为刺激细胞;采用红细胞裂解法制备正常SPL作为反应细胞;将PBL或CD4+CD25+Tregs或非CD4+CD25+Treg淋巴细胞或SPL与SPL1:1共培养,分别于0.5、2、4、8、12和24h收集共培养细胞上清液,ELISA法检测上清液中TGF-β1、IFN-γ和IL-4的含量。 结果:①PBL体外培养0.5～24h产生TGF-β1,且0.5h时产生最高。②PBL刺激SPL0.5h可使IFN-γ和IL-4增多,随后2～12h IFN-γ含量逐渐下降,4～24h IL-4含量逐渐升高,Th指数以Th2增高为主。③非Tregs淋巴细胞对SPL作用不明显;CD4+CD25+Tregs刺激SPL使IL-4依时增加,IFN-γ含量先增加后逐渐减低, Th指数以Th2增高为主; 小结:①来源于PF的PBL在体外短时间培养有分泌功能。②来源于PF的PBL能使Th1/Th2平衡向Th2方向极化。③CD4+CD25+Tregs能使Th1/Th2平衡向Th2方向极化;④来源于 PF的PBL对 Th1/Th2极化的影响有可能是通过CD4+CD25+Tregs来发挥作用的。 第三部分来源于肺纤维化小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞对肺成纤维细胞增殖的影响 目的:探讨来源于 PF小鼠的PBL和CD4+CD25+Tregs对正常肺成纤维(Lung Fibroblasts, LF)细胞增殖的影响。 方法:取生长状态良好的3～5代LF细胞用CFSE标记,然后与来源于PF小鼠的PBL按1:10和1:1比例,或与CD4+CD25+Tregs按1:1比例混合培养48h,采用流式细胞仪检测LF细胞荧光强度,反映LF细胞增殖指数。采用MTT法检测 CD4+CD25+Tregs0.5和2h培养上清液对LF细胞增殖程度的影响。 结果:①来源于PF的PBL和CD4+CD25+Tregs分别与LF10:1或1:1混合培养均可使LF细胞增殖指数明显增高。③CD4+CD25+Tregs培养0.5和2h后的培养上清液可使LF增殖增加。 小结:来源于PF小鼠的CD4+CD25+Tregs可直接或间接引起LF增殖。来源于PF的PBL导致LF增殖很可能是CD4+CD25+Tregs作用所致。 结论:CD4+CD25+Tregs的变化可指示BLM诱导的小鼠PF的不同病程;它可使Th1/Th2向Th2方向极化,并且LF增殖。