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研究背景频复发（Frequently relapsing,FR）或激素依赖型（Steroid-dependent,SD）肾病综合征（Nephrotic syndrome,NS）遵循复发和缓解过程,需长期激素治疗,常出现副作用,如肥胖、骨质疏松、高血压等,需加免疫抑制剂。临床特征主要为蛋白尿和水肿,可显著影响患儿健康相关的生活质量（Health-related quality of life,HRQOL）。本研究通过观察一疗程利妥昔单抗（Rituximab,RTX）治疗FRSDNS的疗效,分析比较利妥昔单抗、他克莫司、环磷酰胺作为一线免疫抑制剂治疗儿童FRSDNS的疗效及副作用,同时评估患儿HRQOL;并进一步应用利妥昔单抗和/或甲泼尼龙（Methylprednisolone,MP）干预嘌呤霉素（Puromycin aminonucleoside,PAN）损伤后的足细胞,观察不同时间点瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（Transient receptor potential cation channel 6,TRPC6）蛋白及 mRNA 的表达。研究方法2017年12月至2020年2月,16名确诊为FRSDNS既往曾使用免疫抑制剂且出现明显副作用且确诊NS的时间至少大于1年的儿童被纳入研究,每例患儿均静脉给予一疗程RTX（375mg/m2）;2019年6月至2020年7月,51例既往未使用免疫抑制剂且确诊NS至少大于6个月的FRSDNS患儿分为利妥昔单抗（375 mg/m2）组、他克莫司组、环磷酰胺组,同时强的松逐渐减量。有效性定义为蛋白尿缓解。同时观察RTX、他克莫司、环磷酰胺的副作用。并分析比较治疗前后临床表现和副作用。采用中国香港4.0版本儿科生活质量家长问卷（Pediatric Quality of Life Inventory,PedsQLTM）评估患儿 HRQOL。体外培养足细胞,CCK-8法检测足细胞活性,并检测PAN、MP、RTX最佳浓度。PAN诱导足细胞损伤构建经典模型,并以MP和/或RTX干预,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测足细胞TRPC6mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测凋亡,双抗体夹心酶联免疫吸附（Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELIS A）法检测足细胞培养上清液 IL-1β、IL-18。结果（1）16名患儿均完成本项研究,并随访1-3.25年。其中,3例SDNS患儿和3例FRNS患儿已停服所有药物;3例SDNS患儿和3例FRNS患儿出现1～2次复发。平均无复发时间为（79.00±77.64）天。RTX治疗6个月后强的松和其他免疫抑制剂的平均剂量显著低于治疗前6个月（P＜0.05、0.001）。RTX治疗后复发率明显降低（P＜0.0001）。仅少数患儿出现药物副作用,其中皮疹（1例）、高血压（1例）和发热（1例）。在接受RTX治疗6个月后,总健康评分、身体、情绪和学校功能评分均显著升高（P均＜0.001）。（2）治疗后6个月较治疗前6个月,利妥昔单抗组、他克莫司组、环磷酰胺组患儿平均复发次数均显著下降（P＜0.05）。利妥昔单抗组治疗后1年无复发率明显低于其他2组（P＜0.05）。利妥昔单抗组平均首次复发时间为8.3月,他克莫司及环磷酰胺组分别为4.6月、3.3月。利妥昔单抗组的复发次数和总强的松剂量显著低于其它2组（P＜0.05）。三组治疗均具有较小的副作用。其中,环磷酰胺组的感染发生次数是其他两组的2倍（P=0.001）。治疗后1年,利妥昔单抗组总健康评分、心理健康总评分、社交和学校功能评分均显著高于其它2组（P均＜0.05）。（3）CCK-8法检测出PAN（50μg/mL）处理足细胞8h、24h、48h存在明显的细胞易变性,故可用来构建PAN损伤足细胞模型。MP（100 ng/mL）及RTX（100μg/mL）处理足细胞8h、24h、48h后细胞易变性小,故为最佳浓度。PAN刺激后各时间点TRPC6 mRNA及蛋白的表达较对照组均显著增高（P均＜0.05）。MP和/或RTX干预8h,TRPC6蛋白表达无明显变化;24h、48h,TRPC6蛋白表达显著下降,与PAN刺激组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;各时间点TRPC6 mRNA的表达均低于PAN组（P均＜0.05）。PAN刺激24h、48h足细胞凋亡率与对照组比较,显著升高;与PAN组比较,MP、RTX干预组足细胞凋亡率显著降低（P均＜0.05）。8h、24h、48h,PAN刺激组IL-1β、IL-18明显高于正常对照组;MP干预组 IL-1β、IL-18 显著低于 PAN 组（P 均＜0.05）。24h、48h,RTX 干预组较 PAN 组IL-1β、IL-18 显著下降（P均＜0.05）。结论（1）一疗程RTX治疗儿童FRSDNS是有效和安全的,且可改善患儿HRQOL,特别是身体、情绪和学校功能。（2）作为一线免疫抑制剂治疗FRSDNS患儿,利妥昔单抗疗效明显优于环磷酰胺和他克莫司,且安全性更高。利妥昔单抗较他克莫司及环磷酰胺可显著提高患儿生活质量,尤其是心理、社交及学校功能。（3）MP及RTX通过降低TRPC6 mRNA及蛋白的表达、减少足细胞凋亡、抑制炎症因子表达,从而抑制足细胞损伤,达到保护足细胞和抗蛋白尿的作用。第一部分 利妥昔单抗应用于儿童频复发或激素依赖型肾病综合征的疗效观察及生活质量评估研究背景频复发（FR）或激素依赖型（SD）肾病综合征（NS）遵循复发和缓解过程。临床特征主要为蛋白尿和水肿,可显著影响患儿健康相关的生活质量（HRQOL）。本研究通过观察比较一疗程利妥昔单抗（RTX）治疗FRSDNS的疗效,同时评估患儿HRQOL。研究方法16名确诊为FRSDNS的儿童被纳入研究。每例患儿均静脉给予一疗程RTX（375mg/m2）。有效性定义为蛋白尿缓解。同时观察RTX的副作用。应用儿科生活质量家长问卷PedsQLTM4.0量表评估HRQOL。结果（1）所有患儿均完成本项研究,并随访1-3.25年。其中,3例SDNS患儿和3例FRNS患儿已停服所有药物;3例SDNS患儿和3例FRNS患儿出现1～2次复发。平均无复发时间为（79.00±77.64）天。（2）RTX治疗6个月后强的松和其他免疫抑制剂的平均剂量显著低于治疗前6个月（P＜0.05、0.001）。RTX治疗后复发率明显降低（P＜0.0001）。（3）仅少数患儿出现药物副作用,其中皮疹（1例）、高血压（1例）和发热（1例）。（4）在接受RTX治疗6个月后,总健康评分、身体、情绪和学校功能评分均显著升高（P均＜0.001）。结论一疗程RTX治疗儿童FRSDNS是有效和安全的,且可改善患儿HRQOL,特别是身体、情绪和学校功能。第二部分 利妥昔单抗、环磷酰胺、他克莫司作为一线免疫抑制剂应用于儿童频复发或激素依赖型肾病综合征的疗效比较及生活质量评估研究背景频复发（FR）或激素依赖型（SD）肾病综合征（NS）需长期激素治疗,出现副作用如肥胖、骨质疏松、高血压等,影响生活质量,需加免疫抑制剂。本研究通过分析比较利妥昔单抗、环磷酰胺、他克莫司作为一线免疫抑制剂治疗儿童FRSDNS的疗效及副作用,并评估患儿HRQOL。研究方法 2019年～2020年,51例既往未使用免疫抑制剂的FRSDNS患儿分为利妥昔单抗（375 mg/m2）组、环磷酰胺组、他克莫司组,同时强的松逐渐减量。并分析比较治疗前后临床表现和副作用。采用儿科生活质量家长问卷PedsQLTM4.0量表评估患儿HRQOL。结果（1）治疗后6个月较治疗前6个月,三组患儿平均复发次数均显著下降（P＜0.05）。利妥昔单抗组治疗后1年无复发率明显低于其他2组（P＜0.05）。利妥昔单抗组平均首次复发时间为8.3月,他克莫司及环磷酰胺组分别为4.6月、3.3月。（2）利妥昔单抗组的复发次数和总强的松剂量显著低于其它2组（P＜0.05）。（3）三组治疗均具有较小的副作用。其中,环磷酰胺组的感染发生次数是其他两组的 2 倍（P=0.001）。（4）治疗后1年,利妥昔单抗组总健康评分、心理健康总评分、社交和学校功能评分均显著高于其它2组（P均＜0.05）。结论（1）作为一线免疫抑制剂治疗FRSDNS患儿,利妥昔单抗疗效明显优于环磷酰胺和他克莫司,且安全性更高。（2）利妥昔单抗可显著提高患儿生活质量,尤其是心理、社交及学校功能。第三部分利妥昔单抗和甲泼尼龙通过下调瞬时受体电位阳离子通道蛋白6表达减轻嘌呤霉素诱导的足细胞损伤目的 本研究应用利妥昔单抗（RTX）和/或甲泼尼龙（MP）干预嘌呤霉素（PAN）损伤后的足细胞,观察不同时间点瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）蛋白及mRNA的表达。方法 体外培养足细胞,CCK-8法检测足细胞活性,并检测PAN、MP、RTX最佳浓度。PAN诱导足细胞损伤构建经典模型,并以MP和/或RTX干预,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测足细胞TRPC6 mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测凋亡,双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测足细胞培养上清液IL-1β、IL-18。结果（1）CCK-8法检测出PAN（50μg/mL）处理足细胞8h、24h、48h存在明显的细胞易变性,故可用来构建PAN损伤足细胞型。MP（100ng/mL）及RTX（100μg/mL）处理足细胞8h、24h、48h后细胞易变性小,故为最佳浓度。（2）PAN刺激后各时间点TRPC6 mRNA及蛋白的表达较对照组均显著增高（P均＜0.05）。MP和/或RTX干预8h,TRPC6蛋白表达无明显变化;24h、48h,TRPC6蛋白表达显著下降,与PAN刺激组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;各时间点TRPC6 mRNA的表达均低于PAN组（P均＜0.05）。（3）PAN刺激24h、48h足细胞凋亡率与对照组比较,显著升高;与PAN组比较,MP、RTX干预组足细胞凋亡率显著降低（P均＜0.05）。（4）8h、24h、48h,PAN刺激组IL-1β、IL-18明显高于正常对照组;MP干预组IL-1β、IL-18 显著低于 PAN 组（P均＜0.05）。24h、48h,RTX 干预组较 PAN 组 IL-1β、IL-18显著下降（P均＜0.05）。结论MP及RTX通过降低TRPC6mRNA及蛋白的表达、减少足细胞凋亡、抑制炎症因子表达,从而抑制足细胞损伤,达到保护足细胞和抗蛋白尿的作用。