同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗兔膝关节软骨缺损的研究

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目的本研究通过提取同种异体兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),探索膝关节注射不同BMSCs浓度对软骨缺损的疗效影响,并比较BMSCs注射治疗与搭载软骨碎块的富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)凝胶移植治疗软骨缺损的修复效果。方法1.新西兰大白兔2只,提取股骨骨髓行BMSCs的培养及传代,采用流式细胞术进行BMSCs的表型鉴定。2.取新西兰大白兔30只,随机分为5组,分别于双侧股骨滑车建立软骨缺损模型。建模成功1周后,对照组于膝关节腔内注射1ml生理盐水,10~5组、10~6组、10~7组、10~8组分别注射1ml细胞浓度为10~5个/ml、10~6个/ml、10~7个/ml、10~8个/ml的BMSCs。6周、12周后每组各取3只动物制成股骨滑车标本,行大体观察、HE染色、番红-O-固绿染色、Ⅰ型及Ⅱ型胶原染色,评估软骨组织修复效果,相关数据行统计学分析。3.取新西兰大白兔24只,随机分为4组,分别建立软骨缺损模型。对照组予生理盐水1ml注射治疗;微骨折组行微骨折术治疗;软骨碎块凝胶组,抽取兔静脉血10ml,离心取0.5mlPRP,混合软骨碎块后制成凝胶移植于缺损区域。BMSCs组关节内注射1ml细胞浓度为10~7个/ml的BMSCs。6周、12周后每组各取3只动物制成滑车标本,行大体观察及组织学染色分析,评估软骨组织修复效果,相关数据行统计学分析。结果1.在细胞浓度实验中,空白组术后缺损软骨无明显再生。10~5组、10~6组、10~7组缺损区域可见软骨再生,Ⅰ型及Ⅱ型胶原染色增强,差异有统计学意义(P<0.05)。10~8组软骨修复结果与10~7组相似(P>0.05)。2.在比较BMSCs与软骨碎块凝胶实验中,空白组术后缺损软骨无明显再生。微骨折组、软骨碎块凝胶组、BMSCs组可见软骨再生,Ⅰ型及Ⅱ型胶原染色增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞浓度研究中,软骨修复效果在一定范围内随浓度增加而增加,当浓度超过10~7个/ml时组织修复能力保持稳定。软骨碎块化PRP凝胶移植对软骨缺损的治疗效果优于微骨折术,是一种简单有效的方法。关节注射BMSCs的修复效果最佳,更有利于透明软骨的结构重建和功能恢复。关节腔注射BMSCs是一种治疗软骨缺损的有效方法,适宜的细胞浓度有利于提高软骨再生能力。
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