【摘 要】
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为了建立一种新的鼻咽癌(NPC)血清学诊断方法,该课题对EB病毒特异性DNA酶(EBV-DNase)的制备、纯化及临床应用进行了以下系列研究.1.采用联合化学诱导的方法诱导细胞株制备EBV
【出 处】
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湖南医科大学 中南大学湘雅医学院 中南大学
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为了建立一种新的鼻咽癌(NPC)血清学诊断方法,该课题对EB病毒特异性DNA酶(EBV-DNase)的制备、纯化及临床应用进行了以下系列研究.1.采用联合化学诱导的方法诱导细胞株制备EBV-DNase粗提物.TPA+正丁酸处理P<,3>HR-1细胞株48小时,然后超声破碎,离心收集上清液即得EBV-DNase粗提物.用SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)及放免酶活性检测法测定粗提物中的EBV-DNase;2.采用纤维素柱层析方法对粗提物进行纯化.利用多种纤维素(DEAE-52纤维素,磷酸纤维素,DNA纤维素)柱层析,对已证实有EBV-DNase活性的粗提物予以线性梯度柱层析洗脱,对洗脱液行SDS-PAGE,放免法酶活性检测;3.采用Western Blot法及抗酶率法对血清中EBV-DNase抗体进行检测.血清样本分三组:鼻咽癌(NPC)组(264例),头颈部其它癌瘤(OC)组(64例),健康成人组(80)例.所有血清均同时行EBVCA-IgA检测.以上结果表明:聚合化学诱导能成功地使EB病毒DNA酶在P<,3>HR-1细胞株中增强表达.运用纤维素柱层析方法较满意地将EBV-DNase从细胞粗提物中分离、纯化,得到理想的纯化产物.用Western Blot法检测血清中EBV-DNase抗体,具有较高的灵敏度及特异度,不仅可以减少鼻咽癌的漏诊、误诊,还有可能对鼻咽癌进行早期诊断,估计其预后,对疗效监测有所帮助.
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