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目的:通过同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)诱导H9C2心肌细胞凋亡,探讨槲皮素(Quercetin,Que)对同型半胱氨酸诱导的心肌细胞凋亡的保护作用及其可能存在的机制,为槲皮素的临床应用提供实验依据。方法:1、采用体外培养H9C2心肌细胞,通过MTT比色法检测不同浓度槲皮素((10umol/L,20umol/L,30umol/L,40umol/L,50umol/L)对基础状态下的H9C2心肌细胞活性的影响,选择对H9C2心肌细胞活性无影响的槲皮素浓度即10‐30umol/L进行下一步实验。2、通过MTT比色法检测不同浓度同型半胱氨酸((0.1mmol/L,0.5mmol/L,1mmol/L,2.5mmol/L,5mmol/L)对H9C2心肌细胞活性的影响,选择细胞活性率在50%‐60%左右时的同型半胱氨酸浓度即2.5mmol/L进行下一步实验。3、观察槲皮素对同型半胱氨酸氨酸诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用。实验随机分为以下几组:正常对照组,2.5mmol/L同型半胱氨酸组,槲皮素(10umol/L,20umol/L,30umol/L)+同型半胱氨酸(2.5mmol/L)组。通过MTT比色法检测槲皮素对同型半胱氨酸诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用。实验结果发现槲皮素能够保护同型半胱氨酸引起的心肌细胞活性降低,且20umol/L槲皮素对同型半胱氨酸诱导的心肌细胞保护作用最强,因此最终选择20umol/L槲皮素及2.5mmol/L同型半胱氨酸进行下一步实验4、通过Hoechst3342染色法借助荧光显微镜观察各组细胞的凋亡情况,实验分组如下:正常对照组,2.5moml/L同型半胱氨酸组,20umol/L槲皮素+2.5mmol/L同型半胱氨酸组,各组细胞培养12h。5、通过Western blot法检测凋亡蛋白caspase‐3的表达,进一步定量观察各组细胞凋亡情况,实验分组及各组细胞培养时间同上。6、2,7‐二氯二氢荧光素二乙酸酯(2’,7‐Dichlorodihydrofluorescein diacetate,H2DCFDA)探针借助荧光分光光度计检测各组心肌细胞内活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)。实验分组同上。结果:1、低浓度槲皮素对基础状态下的H9C2心肌细胞刺激12h后对其活性无影响,结果显示槲皮素浓度组(10umol/L,20umol/L,30umol/L)与正常对照组OD值比较差异无统计学意义。而较高浓度槲皮素会降低H9C2心肌细胞活性率,结果显示槲皮素浓度组(40umol/L,50umol/L)与正常对照组OD值比较,P<0.05,差异有统计学意义。2、0.1‐5mmol/L的同型半胱氨酸呈浓度依耐性引起H9C2细胞活性降低。同型半胱氨酸各浓度组与正常对照组OD值相比较,P小于0.05,差异有统计学意义。3、槲皮素对2.5mmol/L的同型半管氨酸诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用。结果显示2.5mmol/L同型半胱氨酸组与正常对照组OD值相比较,P<0.05,差异有统计学意义。槲皮素各浓度组(10umol/L,20umol/L,30umol/L)+同型半胱氨酸组与同型半胱氨酸组OD值比较,P<0.05。4、Hoechst3342染色结果显示同型半胱氨酸组可以引起H9C2心肌细胞凋亡增加,而槲皮素可以减轻其凋亡。5、Western blot结果提示同型半胱氨酸组较正常对照组相比较凋亡蛋白caspase3表达增强,P<0.05,而槲皮素+同型半胱氨酸组较同型半胱氨酸组相比较,凋亡蛋白caspase3的表达明显减弱。6、同型半胱氨酸较正常对照组相比较可以引起H9C2心肌细胞ROS生成增加,P<0.05,差异有统计学意义。而槲皮素+同型半胱氨酸组较同型半胱氨酸组相比较可以明显减少ROS的生成。结论:1.同型半胱氨酸可以导致H9C2心肌细胞凋亡。2.槲皮素可以保护同型半胱氨酸诱导的H9C2心细胞凋亡。3.槲皮素保护同型半胱氨酸诱导的心肌细胞凋亡可能与减轻氧化应激损伤有关。