阳离子聚合物的设计、合成及基因转染性能研究

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由于阳离子聚合物基因载体在基因治疗方面具有易制备、稳定性高、免疫反应小、质粒负载能力强的优点,所以在本论文中,我们设计了两种不同的阳离子聚合物型基因载体:含RGD的明胶(Gelatin)-聚乙烯亚胺(PEI)聚合物载体(GT-PEIx)和氨基化修饰的可控规整聚合物基因载体。明胶是一种通过酸法或者碱法水解动物胶原蛋白获得的变性蛋白,明胶具有一段精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的序列肽(RGD),RGD可以与癌细胞表面11种整合素特异性结合,增加细胞粘附,提高细胞吸收能力。据此我们在设计聚合物时将明胶修饰,增加一段连接臂再与不同浓度,不同结构,不同分子量的聚乙烯亚胺(PEI)偶联,合成了 64种具有癌细胞靶向的明胶-聚乙烯亚胺聚合物载体。同时探究不同的PEI浓度,PEI的分子结构,PEI的分子量对所合成聚合物转染性能的影响。我们发现GT-PEI11为效果最好的聚合物载体,其在A549,B16F10,COS7,HEPG2中的转染效率分别达到了 74%、58%、66%、29%,与正常细胞COS7,HEPG2相比,在癌细胞A549和B16F10中的转染效率更高,说明RGD序列对于癌细胞具有靶向作用,有利于提高聚合物基因载体的转染效率。与PEI 25kDa 30%的转染效率相比,GT-PEIx聚合物在拥有较高转染效率的同时,具有较低的细胞毒性,在基因运送方面具有很好的应用前景。规整阳离子聚合物作为基因载体具有结构规整,分子量易于控制,方便修饰的优点。我们用氨酸5-苄酯N-羧基环内酸酐和呋喃甲胺开环聚合得到规整的阳离子聚合物骨架,并对得到的骨架再进行氨基修饰增加其正电荷浓度,使其负载质粒DNA,可以修饰乙二胺,N,N-二甲基乙二胺,1,5-二氨基-2-甲基戊烷等不同小胺,并对得到的阳离子聚合物进行细胞转染实验,P6在A549,B16F10,COS7,HEPG2中的转染效率分别为43%,48%,53%,27%高于PEI25kDa 30%的转染效率。通过实验我们发现当规整的聚合物骨架氨基化之后,其基因转染效率有所上升,但是当骨架修饰上去的小胺过多会导致聚合物表面的正电荷浓度过大,毒性会有所增加,基因转染效率反而变低。
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