食管鳞癌发生发展中基因表达谱的改变及相关基因的克隆

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cs80085829
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本课题应用cDNA微阵列技术研究了食管鳞癌发生发展过程中5个不同时期(正常、食管上皮不典型增生Ⅰ级、食管上皮不典型增生Ⅱ级、食管原位鳞癌和食管鳞癌)的基因表达谱。比较和分析5个时期基因表达谱的数据,发现许多基因在食管上皮不典型增生Ⅰ级时就已经开始出现表达水平的改变。一些已知的肿瘤相关基因在4个连续的异常时期持续表达上调或下调。半定量逆转录PCR和免疫组织化学结果证实大多数被检测基因的表达变化趋势被正确揭示,本实验所得的5个基因表达谱数据是可信的。进一步的主成分分析确定了一些在食管鳞癌发生发展中可能起重要作用的基因。以上结果提示利用cDNA微阵列技术将有助于发现食管鳞癌形成最常累及的基因并为这种疾病的诊断、治疗和预防提供理论基础。基因表达谱数据显示,EST片段aa700351在肿瘤组织中表达增加。根据aa700351的核苷酸序列和GenBank中收录的信息,我们拼接得到了一个新的食管鳞癌相关基因的全长cDNA,将其命名为EC97,并通过克隆、测序确定了拼接序列的正确性。EC97全长3353bp,编码产物含813个氨基酸。Northern杂交结果表明,EC97在大多数正常成人组织中均有一大小约3.4kb的转录本。用逆转录PCR在60%(24/41)被检配对食管鳞癌标本中观察到EC97的表达上调。运用放射杂交技术将EC97定位于人染色体16p12-16p13.1。EC97含25个外显子,基因组序列大于100kb。EC97蛋白含有多种功能结构域,推测可能是一个中性的细胞内非分泌蛋白。
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