【摘 要】
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【目的】构建大鼠神经营养因子-4(neurotrophin-4，NT-4)基因的真核表达载体pcDNA-3-NT-4并观察其稳定转染的绿色荧光蛋白(Green flurescent protein，GFP)转基因小鼠骨髓基质干
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【目的】构建大鼠神经营养因子-4(neurotrophin-4，NT-4)基因的真核表达载体pcDNA-3-NT-4并观察其稳定转染的绿色荧光蛋白(Green flurescent protein，GFP)转基因小鼠骨髓基质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell，BMSCs)中神经营养因子-4(NT-4)表达的情况。 【方法】用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以大鼠海马总RNA为模板扩增神经营养因子-4(NT-4)，应用基因重组技术将NT-4的全长基因克隆到真核表达载体pcDAN3中，用限制性内切酶酶切分析和DNA测序对重组质粒载体pcDNA3-NT-4进行鉴定。采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒载体转染荧光小鼠骨髓基质干细胞，用G418筛选出抗性阳性克隆并培养至30d。应用NT-4免疫细胞化学反应来分析该细胞表达NT-4的情况，并观察该细胞培养上清中的NT-4对PC12细胞的促分化作用。 【结果】RT-PCR产物琼脂糖电泳结果显示：在预期位置有阳性条带。重组载体经酶切、测序等分析插入的基因片段为表达NT-4全长基因。免疫组织化学染色显示，转染NT-4基因的BMSCs细胞呈NT-4阳性反应，而转染空载体对照组的细胞呈NT-4阴性反应。加入转染重组载体pcDNA3-NT-4的BMSCs上清液的PC12细胞，胞体呈梭形，有明显的突起，而加入转染空载体pcDNA3的BMSCs上清液的PC12细胞，胞体基本呈圆形，没有明显的突起。
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