抗HIV-1单链抗体重组白喉毒素的构建与表达研究

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重组免疫毒素被称为“生物导弹”,是目前肿瘤、自身免疫性疾病以及移植排斥等免疫治疗领域的热点研究方向之一。对于AIDS而言,由于免疫毒素能够特异性的杀伤HIV潜伏感染细胞,彻底摧毁病毒储存池,而对正常细胞毒性很低,从而成为当前HAART辅助治疗的亮点。 为了获得针对HIV-1的无毒副作用且能根除体内病毒的药物,进行了重组免疫毒素的表达,期望其针对HIV病毒和感染细胞的特异杀伤作用可以最终实现抗病毒这一治疗目的。 将获得的单链抗体(ScFv)基因分别代替白喉毒素DT的受体结合区以及白喉毒素DT的受体结合区和跨膜区,制备出重组毒素基因DT-ScFv,利用原核表达载体pET28a,构建了用于表达重组毒素的原核表达质粒pET-DT-hS120、pET-DTA-hS120,上述质粒转化受体菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,成功地表达了目的蛋白,表达量分别为21%,23%,并利用Ni-NTA金属螯合层析法对表达产物进行了纯化及复性处理。
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