【摘 要】
：
胃癌是全球最为常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在我国所有恶性肿瘤中均居前列。课题组前期通过免疫组化等实验研究发现ANXA1、S100A9和Vimentin三种蛋白的表达水平可能与胃癌的发生发展、浸润转移等恶性生物学行为相关,并通过统计学等级相关检验分析发现这三种蛋白的表达水平具有一定的相关性。本研究旨在初步探讨ANXA1对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制,为胃癌远处转移的分子机制提供
【基金项目】
：
国家自然科学基金项目（No.81372894）； 湖南省自然科学基金项目（No.2021JJ30589）；
论文部分内容阅读
胃癌是全球最为常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在我国所有恶性肿瘤中均居前列。课题组前期通过免疫组化等实验研究发现ANXA1、S100A9和Vimentin三种蛋白的表达水平可能与胃癌的发生发展、浸润转移等恶性生物学行为相关,并通过统计学等级相关检验分析发现这三种蛋白的表达水平具有一定的相关性。本研究旨在初步探讨ANXA1对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制,为胃癌远处转移的分子机制提供实验室数据。方法:1.采用Western blot实验检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌BGC--823、MGC803、SGC7901、HGC27细胞中ANXA1的表达情况。2.构建ANXA1过表达与干扰质粒。3.运用脂质体转染技术,建立ANXA1过量与敲低表达的重组胃癌细胞系（MGC803-ANXA1（+）、BGC823-ANXA1-sh RNA）和相对应的空载体对照细胞系（MGC803-vector、BGC823-scramble）。4.运用RT-q PCR实验、Western blot实验分析检测ANXA1过表达质粒转染组、ANXA1干扰质粒转染组以及相应的过表达和干扰对照组中ANXA1 m RNA和蛋白质的表达情况,并选择ANXA1过表达效果较好的MGC803-ANXA1（+）细胞和ANXA1干扰效果较好的BGC823-ANXA1--sh2与BGC823-ANXA1-sh3细胞进行后续实验。5.采用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell迁移侵袭实验,观察ANXA1表达上调或下调对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。6.采用Western blot实验检测胃癌细胞系中ANXA1表达上调和下调对S100A9和Vimentin蛋白表达的影响。结果:1.Western blot实验检测ANXA1在GES-1细胞和不同胃癌细胞系中的表达情况,结果显示:与GES-1细胞相比,ANXA1在胃癌细胞中低表达（P＜0.05）,其中,在胃癌BGC823和SGC7901细胞中的表达相对较高,在胃癌MGC803和HGC27细胞中的表达相对较低。2.成功构建ANXA1过表达与干扰质粒。3.瞬时转染ANXA1过表达载体,RT-q PCR及Western blot实验的结果显示:与对照组细胞系MGC803-vector相比,在过表达ANXA1质粒转染组MGC803-ANXA1（+）细胞中,ANXA1 m RNA和蛋白表达的水平明显上调（P＜0.01）。4.瞬时转染ANXA1干扰载体,RT-q PCR及Western blot实验的结果显示:与对照组细胞系BGC823-scramble相比,在ANXA1干扰质粒转染组BGC823-ANXA1-sh RNA细胞中,ANXA1 m RNA和蛋白表达的水平明显下调（P＜0.0001）,其中BGC823-ANXA1-sh2和BGC823-ANXA1-sh3干扰效果最佳。5.CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell迁移侵袭实验分别检测上调或下调ANXA1表达后对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭产生的影响,结果显示:上调ANXA1表达后,胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（P＜0.01）,而下调ANXA1表达后,胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显增强（P＜0.05）。6.Western blot检测胃癌细胞系中ANXA1表达上调和下调对S100A9和Vimentin蛋白表达的影响。结果显示:上调ANXA1表达后,S100A9和Vimentin蛋白表达水平降低,而下调ANXA1表达后,S100A9和Vimentin蛋白表达水平升高（P＜0.0001）。结论:1.ANXA1具有抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。2.ANXA1影响胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭可能与S100A9和Vimentin蛋白表达有关。
其他文献
[目的]鼻咽癌的恶性程度高,由于其好发部位为位置较隐匿的鼻咽隐窝,发病率在头颈部恶性肿瘤中占比最高,因此在治疗方式的选择中,首选放射治疗。但在放射治疗的中后期,会辅以化疗来联合治疗。现有的研究结果发现,对化疗药物耐药的细胞也出现了放疗抵抗的现象,使得放射治疗效果不佳。本课题组前期研究结果发现,STGC3基因高表达,低分化鼻咽癌细胞CNE2的放疗敏感性增强。本研究基于前期研究成果,探究CNE2及CN
[背景与目的]动脉粥样硬化（Atherosclerosis,As）是由脂质驱动的慢性血管病变,血管壁的脂质蓄积和泡沫细胞形成被认为是As的初步病理表现和主要形成因素。其中,泡沫细胞的形成是As的早期标志。胆固醇流出受损是泡沫细胞形成的主要原因之一。N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）修饰是真核生物中最丰富的RNA修饰,占RNA修饰的60%。最近,研究发现m6A在As和冠
【目的】mi R-3619-5p在多种癌症类型中表达异常。本课题组前期研究发现长链非编码RNA NBR2（lnc RNA NBR2）在胃癌细胞系中高表达,发挥促癌作用,且NBR2与mi R-3619-5p存在直接结合的关系,因而本实验将进一步探讨mi R-3619-5p对胃癌细胞生物学功能的影响及其鉴别其下游靶基因。【方法】1.q RT-PCR检测mi R-3619-5p在胃癌细胞SGC7901、
【背景】心肌梗死（Myocardial infarction,MI）的发病率和死亡率在国际范围内都居高不下。目前临床上主要的治疗手段为经皮冠状动脉介入术（Percutaneous coronary intervention,PCI）,这可以使心外膜冠状动脉的血流得到恢复,从而降低患者的死亡率。但仍有相当一部分的患者在恢复血流灌注之后,心肌损伤反而加重,即“心肌缺血-再灌注损伤（Myocardial
【目的】本研究旨在探讨SFN-RAB7通路在调控上皮间质转化（EMT）中的作用,及其与鼻咽癌（NPC）迁移侵袭的关系,为临床上NPC的靶向治疗提供理论依据和实验基础。【方法】1.采用Western Blot检测NPC细胞系5-8F和6-10B中SFN与RAB7的表达情况。2.利用ZDOCK2.3.2在线网站分析SFN与RAB7之间的结合关系。3.利用p CDH-CMV-MCS-EF1a-GFP载体
【背景】慢性心力衰竭的发生发展是一个复杂的过程,它是由多种机制共同作用的结果。不同原因所导致的心力衰竭以及心力衰竭发展的不同阶段其参与作用的机制可能不同,而神经-体液调节失衡以及能量代谢障碍在其中起着关键作用。在神经体液失衡机制中,RAAS系统的激活,特别是血管紧张素II（AngⅡ）水平的增加,在不利的心肌重构和心力衰竭的进展中起着举足轻重的作用。前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein c
背景:动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是心血管疾病主要病理基础,其发生发展与巨噬细胞息息相关。脂肪量与肥胖相关基因（FTO）作为第一个m~6A m RNA去甲基化酶的发现确立了可逆RNA修饰的概念,FTO是主要m~6A“橡皮擦”之一。N6甲基腺苷（N6-methyladenosine,m~6A）修饰影响脂质代谢过程,与人体脂质紊乱疾病进展有关。作为真核生物信使RNA（m RNA
目的:PLCD1（Phospholipase C delta 1）基因位于3p22,编码一种可以介导细胞能量代谢、钙离子稳态和细胞内运动的酶。PLCD1在几种类型肿瘤中发挥抑瘤作用,但其在肾细胞癌（RCC）中的表达与作用尚不清楚。本研究观察PLCD1在肾细胞癌中的表达情况,并探索PLCD1表达异常的原因,进一步揭示PLCD1在肾细胞癌中的作用与初步机制。方法:本研究通过生信分析PLCD1在肾癌组织
【目的】探讨烟酰胺单核苷酸（NMN）改善PCOS大鼠子宫内膜组织稳态的作用。【方法】将45只雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组（CON组）15只和模型组（PCOS组）30只。CON组大鼠进行普通饲料喂养,PCOS组大鼠用来曲唑连续灌胃30天,同时进行高脂饲料喂养,建立PCOS大鼠模型。PCOS模型构建成功后,将大鼠随机分为模型组（PCOS组）15只和NMN干预组（实验组）15只。N
[目的]胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类的生命和健康。课题组前期利用同位素标记定量蛋白质组学技术,筛选与鉴定出胃粘膜癌变相关的血清蛋白质—亮氨酸氨基肽酶3（leucine aminopeptidase 3,LAP3）。本研究旨在证实LAP3蛋白在胃癌组织及血清中的表达的临床意义,并探究其表达调控机制。[方法]1.采用生物信息学方法,分析TCGA数据库中LAP3蛋白在胃腺癌组织和正常胃粘