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[目的]胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类的生命和健康。课题组前期利用同位素标记定量蛋白质组学技术,筛选与鉴定出胃粘膜癌变相关的血清蛋白质—亮氨酸氨基肽酶3（leucine aminopeptidase 3,LAP3）。本研究旨在证实LAP3蛋白在胃癌组织及血清中的表达的临床意义,并探究其表达调控机制。[方法]1.采用生物信息学方法,分析TCGA数据库中LAP3蛋白在胃腺癌组织和正常胃粘膜组织中的表达情况。通过免疫组织化学染色技术观察胃癌组织芯片中LAP3蛋白的表达情况,分析LAP3蛋白与患者临床病理参数间的关系。2.采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测60例胃癌患者血清中LAP3蛋白的含量,分析其表达的临床病理学意义,然后绘制ROC曲线,分析患者血清中的含量对胃癌诊断的敏感性和特异性。3.采用免疫组织化学染色技术观察上述血清配对60例胃癌患者组织中的LAP3、PRSS1、EGFR和Ki-67蛋白的表达情况,分析LAP3蛋白与上述蛋白联合检测在胃癌诊断中的价值。4.利用ELISA检测胃癌细胞MGC803、BGC823、SGC7901培养上清和永生化胃粘膜上皮细胞GES-1培养上清中LAP3蛋白的表达情况。5.采用Western blot检测人类永生化胃粘膜上皮细胞GES-1以及胃癌细胞MGC803、BGC823与SGC7901细胞中LAP3蛋白的表达情况。6.通过构建慢病毒干扰表达载体p LKO-LAP3-sh RNA,感染胃癌细胞MGC803和BGC823。连续药物筛选一周后,建立LAP3稳定低表达的MGC803和BGC823细胞系,通过Western blot检测LAP3的干扰效果。7.采用CCK8与平皿克隆形成实验,检测LAP3低表达对胃癌细胞MGC803和BGC823增殖能力的影响。8.利用基因富集方法分析在胃癌细胞中与LAP3相关的信号调节通路,Western blot检测LAP3低表达后,JAK2/STAT3途径相关蛋白的表达变化。9.通过生物信息学方法并结合课题组前期mi RNAs和cir RNAs芯片结果,分析预测调节LAP3表达的mi RNAs和cir RNAs,并通过RT-q PCR进行验证。10.利用双荧光素酶报告基因实验检测mi R-519b-3p与LAP3的靶向结合。[结果]1.通过TCGA数据库分析了LAP3蛋白在胃癌患者组织和正常胃粘膜组织中的表达情况。结果显示,与正常胃粘膜组织比较,LAP3蛋白在胃癌组织中高表达。2.免疫组织化学染色结果显示,在胃癌组织中,LAP3蛋白的表达增高,其在癌旁胃粘膜组织、高-中和低分化腺癌组织中的阳性率依次为55.83%（115/206）、77.27%（102/132）和93.24%（69/74）。LAP3蛋白表达与胃癌的分化程度有关（P=0.001）,与患者的性别、年龄、TNM分期、肿瘤大小和淋巴结转移无关（分别为P=0.697,P=0.901,P=0.398,P=0.186,P=0.569）。3.ELISA结果显示,血清LAP3蛋白在胃癌患者血清中的含量明显高于正常健康人（P＜0.0001）,但是其表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期以及淋巴结转移无关（分别为P=0.258,P=0.781,P=0.463,P=0.464,P=0.224,P=0.212）。ROC曲线分析表明LAP3蛋白对胃癌诊断的敏感性为100%,特异性为50%,ROC曲线下面积为0.713。并且ELISA结果显示LAP3蛋白在胃癌MGC803细胞培养上清中的表达高于永生化胃粘膜上皮GES-1细胞的培养上清。4.免疫组织化学染色结果显示,LAP3蛋白与PRSS1、Ki-67、EGFR蛋白在胃癌组织中均高表达,四种蛋白联合检测可以显著提高胃癌检测的敏感性和特异性,分别为93.33%和91.67%。5.Western blot结果显示胃癌细胞中LAP3蛋白高表达,其中胃癌细胞MGC803和BGC823中表达最高。6.成功构建p LKO-LAP3-sh RNA干扰表达载体,建立了LAP3稳定低表达的MGC803和BGC823细胞系,Western blot验证结果显示sh-LAP3-3组的干扰效果最好。7.LAP3稳定低表达后,MGC803和BGC823细胞的增殖能力明显减弱。8.基因富集分析发现LAP3在胃癌中与JAK/STAT信号通路密切相关。Western blot结果发现,LAP3低表达后胃癌细胞MGC803、BGC823中JAK2和STAT3无明显变化（P＞0.05）。而p-JAK2和p-STAT3蛋白水平降低（P＜0.0001）。结果表明LAP3表达可以影响JAK2/STAT3途径的活化。9.生物信息学分析结果结合芯片结果显示,hsa＿circ＿0011164和hsa＿circ＿0092180可能通过海绵吸附mi R-519b-3p,间接调控靶基因LAP3的表达;经RT-qPCR检测发现mi R-519b-3p在MGC803和BGC823细胞中低表达。hsa＿circ＿0011164在MGC803和BGC823细胞中高表达。10.双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-519b-3p可以通过LAP3 3’UTR区的第323位点调控LAP3的表达。[结论]:1.LAP3蛋白在胃癌组织和血清中高表达,其在胃癌组织中的表达与肿瘤的分化程度有关。LAP3蛋白和PRSS1、Ki-67、EGFR蛋白联合检测可以提高胃癌诊断的敏感性和特异性。2.LAP3可能通过活化JAK2/STAT3途径影响胃癌细胞的增殖。3.hsa＿circ＿0011164可能经miR-519b-3p靶向调控LAP3的表达。