人肺腺癌A-549细胞膜钾离子通道特性与细胞增殖关系的研究

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:marcomak99
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目的:探讨肿瘤细胞离子通道表达异常与肿瘤发生、发展和增殖的关系是当前肿瘤基础研究的新热点。本研究通过观察人肺腺癌A-549细胞膜电压门控性K+电流的特性及钾通道阻断剂四乙胺(TEA)对A-549细胞K+电流和细胞增殖的影响,探讨应用钾通道阻断剂抑制肺腺癌细胞增殖的可行性,为该领域的进一步研究奠定基础。方法:以人肺腺癌细胞系A-549细胞为研究对象,培养24-72小时后,选择单个贴壁良好、立体感强的细胞备用。①细胞电生理实验:用全细胞膜片钳技术记录细胞膜离子通道特性。将微推进器推进微管电极尖端贴至细胞膜,负压抽吸形成高阻封接,并吸破细胞膜形成全细胞膜片;采用去极化阶跃方案引出A-549细胞的电压依赖性外向K+电流,然后将10mmol/L的TEA加至细胞浴液中,记录TEA对K+电流的影响。②细胞体外增殖实验:用四甲基偶氮唑盐比色试验(MTT法)检测0.2、2、20、40和60mmol/L 的TEA分别作用细胞24、48和72小时的酶联检测吸光度值(A),比较不同TEA组对细胞增殖的影响。结果:①全细胞膜片钳记录模式下,A-549细胞在测试电压范围-30至+110mV,保持电压为-70mV时,记录到一种跨膜外向性电流,该跨膜电流具有电压依赖性,并且500ms内不失活;将10mmol/L的TEA加入细胞浴液,可明显抑制该跨膜离子电流,在测试电压为+110mV时,抑制程度为电流从1057.52±59.17pA降低至212.26±11.96pA,电流抑制率为79.92%(p<0.01)。②MTT法细胞增殖实验,各TEA剂量组作用细胞24小时后A值比较显示:A值随着TEA浓度的增加而降低,实验组20、40和60mmol/L 的TEA与空白对照组以及组间两两比较,差异具有统计学意义(p<0.05),而0.2和2mmol/L 的TEA与空白对照组相比差异无统计学意义 ,表明20、40和60mmol/L 的TEA 能明显抑制肺腺癌A-549细胞的体外增殖,抑制率分别为 43%、61%和 78%。结论:人肺腺癌细胞系A-549细胞中存在外向性电压门控性钾通道,该钾通道可被TEA阻断;外向性电压门控性钾通道在肺腺癌A-549细胞增殖过程中起重要作用,钾通道阻断剂TEA能抑制A-549细胞的增殖,对细胞增殖的抑制与TEA存在剂量依赖关系。
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