【摘 要】
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目的:CD133是肿瘤干细胞标记物之一,在肿瘤复发和转移中起重要作用,是多种癌症的潜在治疗靶点;然而,目前尚不清楚CD133单独在调节乳腺细胞癌生物学功能中的作用。方法:（1）免疫组化分析108例人乳腺癌中CD133的表达及其临床相关性。（2）Western blot检测乳腺癌组织和细胞中CD133表达情况;（3）体外培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468,构建针对CD133的
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目的:CD133是肿瘤干细胞标记物之一,在肿瘤复发和转移中起重要作用,是多种癌症的潜在治疗靶点;然而,目前尚不清楚CD133单独在调节乳腺细胞癌生物学功能中的作用。方法:（1）免疫组化分析108例人乳腺癌中CD133的表达及其临床相关性。（2）Western blot检测乳腺癌组织和细胞中CD133表达情况;（3）体外培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468,构建针对CD133的3个不同干扰靶点RNA序列和1个阴性对照,通过慢病毒感染MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞,采用Western Blot方法验证转染后CD133蛋白的表达情况并筛选出干扰效率最高的靶点序列;（4）沉默CD133后MTT、集落克隆实验探究MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞增殖潜能的变化;（5）细胞划痕、Transwell实验观察MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞转染后侵袭和迁移能力的改变;（6）Western blot实验检测沉默CD133基因对乳腺癌细胞EMT相关蛋白水平表达的影响;（7）Western blot实验检测基因下调对乳腺癌细胞中与Wnt/β-catenin信号通路相关的蛋白水平表达的影响。结果:（1）108例乳腺癌组织标本中有72例患者的组织中CD133表达呈阳性（66.7%）,其表达与淋巴结转移、TNM分期、远处转移、病理分化及年龄呈正相关,而与肿瘤大小之间没有显著关系;（2）CD133在乳腺癌细胞中的表达水平明显高于正常人乳腺细胞（P<0.05）,在乳腺癌组织中的表达水平明显高于正常人乳腺组织（P<0.05）。（3）慢病毒转染后的MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞在荧光倒置显微镜下观察细胞中可见绿色荧光,表明目的载体转染并表达于MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞中。Western Blot结果显示,转染后CD133表达下降,MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞CD133沉默株成功构建;（4）MTT、集落克隆实验显示sh-CD133组细胞胞的增殖明显低于sh-NC及Control组（P<0.05）;划痕、Transwell实验说明sh-CD133可以抑制MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞的侵袭及迁移能力（P<0.05）;（5）CD133基因的沉默伴有EMT分子标记E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达下降（P<0.05）;（6）CD133基因的沉默使Wnt/β-catenin信号通路失活,使得相关蛋白WNT1、β-catenin、p-GSK-3β和cyclin D1水平下降,p-β-catenin水平升高,GSK-3β则无明显改变（P<0.05）。结论:CD133在乳腺癌组织及细胞中高表达,是乳腺癌患者预后不良因素之一。抑制CD133表达可抑制乳腺癌细胞的生物学行为。这一过程可能与上皮间质转化（EMT）有关,Wnt/β-catenin信号通路可能参与了这一过程。综上所述,CD133可能对乳腺癌疾病的进展起促进作用,使CD133有望成为乳腺癌治疗的潜在靶点。
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