目的：探索内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）在二乙基亚硝胺（Diethylnitrosamine，DEN）所致大鼠肝癌模型中的分布规律，并进一步探讨其在肝癌形成过程中的作用，为肝癌的治疗提供新的策略。 方法：①分组：将雄性SD大鼠160只，随机分3组：空白对照组（24只）、模型对照组（34只）、EPCs实验组（102只），其中又将EPCs实验组依据注射EPCs浓度不同，分为低、中、高3个浓度组，每组都分成4、6、8周组；空白对照4、6、8周组均为8只／组；模型对照与EPCs低、中、高浓度4周组均为10只／组；模型对照与EPCs低、中、高浓度6、8周组均为12只／组。②造模：取SD大鼠外周血，用Ficoll密度梯度离心法获取单个核细胞，同时用碱性成纤维细胞生长因子（basicity fibroblast growth factor，bFGF）和内皮细胞生长添加剂（endothelial cell growth supplement，ECGS）诱导，Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil—acLDL）和FITC标记的荆豆凝集素—1（FITC—UEA—1）荧光双染色法鉴定EPCs，免疫组化染色法检测EPCs标志物CD34、CD133和KDR的表达，体外经DAPI标记后，并将EPCs—DAPI制成1×106/mL，2×106/mL，4×106/mL的低、中、高浓度悬液，模型对照组和EPCs实验组腹腔注射DEN造模，以0.9%NaCl溶液配置成浓度为40mg/mL（4%）的DEN稀释液，按每次0.1 mL/100g体重的剂量腹腔注射，每周2次，直至8周，空白对照组则腹腔注射与DEN等体积的生理盐水。EPCs实验组自注射DEN的当日开始，经尾静脉注射低、中、高浓度EPCs—DAPI悬液1mL，每周2次，空白对照组和模型对照组经尾静脉注射生理盐水1 mL，分别于第四、六、八周末处死，留取标本。③指标检测：肝功能丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（AST）、白蛋白（ALB），肝癌血清学指标甲胎球蛋白（AFP），肝组织病理HE染色，荧光显微镜观察EPCs—DAPI表达的量及分布的变化，并用Imagepro plus图像分析软件对表达的阳性区域面积（Positive area，PA）作半定量分析。④统计学处理：用SPSS14.0统计软件处理，数据用均数士标准差（X±S）表示，计量资料采用单因素方差分析，规定P<0.05为有统计学意义。 结果：1.动物的一般情况：大鼠在给予DEN注射后，均不同程度地出现体毛干枯无泽、活动及食量减少，大便溏泻、小便黄而少等；不同浓度的EPCs实验组随造摸时间的延长，一般情况更差，活动迟缓，体重降低等，尤以EPCs高浓度8周组明显。2.EPCs的鉴定：倒置显微镜下观察收集的外周血单个核细胞，第2天可见少数细胞贴壁，呈梭形，形态较均一，胞核位于细胞中央。培养4天后可见贴壁细胞数量明显增多，而悬浮细胞减少。7天后细胞梭形更为明显，并逐渐变长。贴壁细胞用Dil—acLDL和FITC—UEA—1行荧光化学染色，Dil—acLDL标记阳性细胞呈红色，FITC—UEA—1标记阳性细胞呈绿色，荧光显微镜下双染色阳性细胞为橙黄色.贴壁细胞培养第7天，细胞表面标志物CD34，CD133和KDR免疫细胞化学染色均呈阳性。3.肝组织肉眼及镜下观：3.1肉眼及HE染色：①空白对照组大鼠肝脏外观呈红褐色，质软，表面光滑；镜下肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常。②模型对照和EPCs低浓度4周组大鼠肝脏外观多呈暗黄色，质地较硬，表面呈小结节状，凸凹不平；镜下癌细胞排列呈梁状或多板状排列。③EPCs低浓度6、8周组和EPCs中浓度4周组大鼠肝脏外观呈暗黄绿色，表面见圆形结节大小不一，有的见单个巨大孤立性癌肿；镜下癌细胞呈梁状腺样结构，弥漫性分布。④EPCs中浓度6、8周组和EPCs高浓度4周组介于③和⑤之间。⑤EPCs高浓度6、8周组大鼠肝脏外观呈黄褐色，表面见形状不规则的结节，有的伴有多个巨大癌肿，边缘清楚，可有纤维包膜包绕；镜下癌细胞呈梁状或腺样或硬癌样结构。3.2免疫组化染色：3.2.1免疫组化染色观察：EPCs实验组中DAPI均呈阳性，且依注射EPCs悬液浓度高低和时间长短呈上升趋势，表达逐渐增强，在视野中密集分布，染色渐深。3.2.2免疫组化染色图像的半定量分析：①EPCs低、中、高浓度4周组，EPCs低、中、高浓度6周组和EPCs低、中、高浓度8周组PA值比较：差异具有显著性（P<0.05）；②低浓度EPCs4、6、8周组，中浓度EPCs4、6、8周组和高浓度EPCs4、6、8周组PA值比较：差异具有显著性（P<0.05）；4.血清学指标的变化：①DEN对肝功的影响：模型对照4周组、低浓度EPCs4周组与空白对照组比较，ALT，AST均显著升高（P<0.05），ALB显著降低（P<0.05）。②EPCs对肝功的影响：EPCs低、中、高浓度4周组，EPCs低、中、高浓度6周组和EPCs低、中、高浓度8周组比较，ALT，AST均显著升高（P<0.05），ALB显著降低（P<0.05）。低浓度EPCs4、6、8周组，中浓度EPCs4、6、8周组和高浓度EPCs4、6、8周组比较，ALT，AST逐渐升高，差异具有显著性（P<0.05），ALB逐渐降低，差异具有显著性（P<0.05）。⑧AFP变化：模型对照4周组、低浓度EPCs4周组与空白对照组比较，明显升高，有显著差异（P<0.05），EPCs低、中、高浓度4周组，EPCs低、中、高浓度6周组和EPCs低、中、高浓度8周组比较，明显升高，有显著差异（P<0.05），低浓度EPCs4、6、8周组，中浓度EPCs4、6、8周组和高浓度EPCs4、6、8周组比较，逐渐升高，差异具有显著性（P<0.05）。 结论：①DEN制作大鼠肝癌模型，具有造模周期短、成功率高、所形成的肝癌模型类似于人类肝癌的发病、损伤机理和病理特点，是研究肝癌发病与防治较理想的模型之一。②EPCs体内示踪在肝组织的分布和表达水平表明其对肝癌有靶向作用。③EPCs对肝癌形成过程有促进作用。④EPCs在肝癌形成过程中对肝功能有影响，且随着造模时间的延长及注射EPCs浓度的升高而加重。⑤EPCs靶向到达肝癌组织的作用机制可能是在肿瘤分泌的VEGF、SDF—1，GM—CSF等多种细胞因子和趋化因子作用下，EPCs从骨髓动员到外周血循环，靶向归巢到癌组织，参与肿瘤血管的生成。