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目的:对桑叶进行发酵处理,优化发酵条件,以此提高桑叶生物碱、黄酮和多糖3大活性成分含量,发酵完成后对这3大活性成分进行初步提取得到混合提取物。采用反式脂肪酸造模高脂小鼠,通过灌胃提取物,研究其对高脂小鼠的基础生长指标、脂肪细胞形态、抗氧化性及脂代谢相关指标的影响。探讨发酵桑叶混合活性成分的脂代谢异常的改善作用,提高对桑叶多组分活性物质的开发利用。方法:(1)以桑叶3大活性成分生物碱、黄酮、多糖含量为指标对桑叶进行发酵。选用植物乳杆菌、米曲霉、绿色木霉3种菌,每种菌在1.5×10~8、3.0×10~8、4.5×10~8、6.0×10~8 CFU/m L四种菌液浓度下单独发酵。得到每种菌的最适发酵浓度后,在此菌液浓度下将3种菌混合,以1:1或1:1:1的比例进行混菌发酵;确定最适发酵菌种及浓度后,设置发酵温度、发酵时间、接种量为单因素,得到每个单因素的最佳条件;在单因素基础上采用响应面法优化桑叶发酵条件,最后对比发酵前后3大活性成分含量的变化。(2)采用反式脂肪酸连续灌胃小鼠8周建立高脂模型,造模成功后,对正常组与模型组灌胃蒸馏水,阳性对照组灌胃90 mg/kg·bw奥利司他,其余组分别灌胃低(75 mg/kg·bw)、中(150 mg/kg·bw)、高(300 mg/kg·bw)剂量的发酵桑叶混合提取物,连续灌胃45 d。记录小鼠体重、腹部脂肪重量、肝重,计算脏器系数和Lee’s指数;用酶联免疫试剂盒检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化脂质(LPO)浓度;用血糖仪测定空腹血糖(FPG);用Pearson相关分析法分析总抗氧化能力与血脂水平的相关性;用HE染色法观察小鼠脂肪组织病理变化。(3)采用酶联免疫吸附法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、瘦素(LEP)、脂联素(ADP)、血清胰岛素(INS)的含量。采用q RT-PCR测定肝脏组织中瘦素(Leptin)、脂联素(ADPN)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)的m RNA表达水平。用Pearson法分析肝脏脂肪因子基因表达量与血清脂肪因子水平之间的相关性。结果:(1)植物乳杆菌为最适发酵菌种,发酵菌液的浓度为3.0×10~8 CFU/m L,与对照组相比,植物乳杆菌单菌发酵组的黄酮、多糖含量差异不显著(P>0.05),生物碱含量提高了69.35%;在单因素基础上,以生物碱和黄酮含量为响应值进行响应面法优化,确定最佳发酵条件为发酵温度37℃、发酵时间12 h和接种量15%,在此条件下它们的含量分别为1.24 mg/g和29.85 mg/g;发酵后对桑叶多糖的影响不显著(P>0.05),桑叶生物碱和桑叶黄酮含量分别增加了26.53%和29.56%(P<0.05)。(2)模型组血清TC和TG较正常组显著升高了22.92%和85.90%(P<0.05),表示造模成功;与模型组相比,阳性药物组和发酵桑叶混合提取物高剂量组小鼠体重、脂肪系数、肝脏系数、Lee’s指数均显著降低,高剂量组上诉指标分别降低了17.29%、6.18%、12.35%、6.66%;与模型组相比,高剂量组TC、TG、LDL-C分别显著降低了32.53%、41.18%、20.75%,HDL-C显著升高了32.17%(P<0.05);FPG显著降低了39.74%(P<0.05);与模型组相比,高剂量组T-AOC和T-SOD显著升高了31.11%和49.72%,MDA和LPO显著降低了40.71%和18.35%(P<0.05);T-AOC、T-SOD水平与血脂四项指标均呈显著相关;脂肪组织切片观察结果显示阳性药物组和发酵桑叶混合提取物各剂量组均能缓解小鼠的脂肪细胞形态,以高剂量组效果最好,且能达到与正常组和阳性药物组差异不显著的水平。(3)与模型组相比,高剂量组血清TNF-α、IL-6浓度分别降低了28.91%、30.93%(P<0.05),TNF-α、IL-6 m RNA相对表达量分别显著下降了39.91%、30.19%(P<0.05);LEP显著降低24.84%,ADP显著升高38.70%(P<0.05),Leptin m RNA表达量下降了47.55%,ADPN m RNA表达量升高了40.76%(P<0.05),胰岛素抵抗水平下降了55.60%(P<0.05);相关性分析显示,Leptin m RNA表达水平与血清LEP浓度、HOMA-IR水平呈高度正相关,与血清ADP浓度呈高度负相关,ADPN m RNA表达水平与血清ADP浓度呈高度正相关,与LEP、HOMA-IR水平呈高度负相关;脂肪转录因子SREBP-1c、PPAR-γm RNA表达量显著降低了42.30%、60.55%(P<0.05),AMPK m RNA表达量显著上升了91.11%(P<0.05)。结论:植物乳杆菌为最适发酵菌种,且可显著提高桑叶生物碱和桑叶黄酮含量,对多糖含量影响不显著;生物碱、黄酮、多糖含量占发酵桑叶混合提取物的79.55%;发酵桑叶混合活性成分可以改善反式脂肪酸造模小鼠的体重、腹脂系数、肝脏系数、Lee’s指数等肥胖指标,恢复脂肪细胞形态,有效提高总抗氧化性改善脂质氧化水平,缓解血脂异常;发酵桑叶混合活性成分能降低炎症因子和脂肪因子的生成,调控脂肪因子生成相关基因,改善高脂模型造成脂代谢相关损伤,预防脂代谢相关疾病。不同剂量的发酵桑叶混合提取物可显著调节脂代谢,以高剂量的作用效果最佳。