【摘 要】
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研究背景:乳腺癌是目前已在世界范围内得到共识的最常见的女性恶性肿瘤,是女性肿瘤性死亡最主要的原因之一。micro RNAs（miRNAs）已被证实在乳腺癌的发生和进展的调控过程中发挥至关重要的作用,但绝大多数miRNA在乳腺癌中的作用机制尚不明确。miR-129-5p是miRNA家族成员之一,许多研究表明,在包括肝细胞癌、神经系统肿瘤、消化道肿瘤和泌尿系统肿瘤等多种实体肿瘤中,miR-129-5p
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研究背景:乳腺癌是目前已在世界范围内得到共识的最常见的女性恶性肿瘤,是女性肿瘤性死亡最主要的原因之一。micro RNAs（miRNAs）已被证实在乳腺癌的发生和进展的调控过程中发挥至关重要的作用,但绝大多数miRNA在乳腺癌中的作用机制尚不明确。miR-129-5p是miRNA家族成员之一,许多研究表明,在包括肝细胞癌、神经系统肿瘤、消化道肿瘤和泌尿系统肿瘤等多种实体肿瘤中,miR-129-5p都发挥着不同程度的抑制肿瘤作用。目前关于miR-129-5p在乳腺癌中发生发展的作用及其机制研究的报道较少。研究目的:本文旨在研究miR-129-5p在乳腺癌中的作用和产生相应作用的分子机制,为探寻乳腺癌新的治疗靶点提供理论依据。研究方法:1.收集30例初诊原发性乳腺癌患者的肿瘤组织和癌旁正常腺体组织标本,采用Reverse Transcription quantitative Polymerase Chain Reaction（RT-q PCR）技术检测配对的肿瘤组织和癌旁正常腺体组织中miR-129-5p的表达水平。2.收集天津医科大学肿瘤医院既往收治的200例原发性乳腺癌患者的病理石蜡标本,采用RT-q PCR技术检测石蜡标本中miR-129-5p的表达水平;统计并分析所收集病例的临床病理因素与miR-129-5p表达水平的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析5年DFS和OS;Cox比例风险回归模型分析乳腺癌复发转移的危险因素。3.采用RT-q PCR技术检测不同乳腺癌细胞系和正常乳腺上皮细胞系中miR-129-5p的表达水平;通过瞬时转染miR-125-5p mimics或inhibitors分别建立miR-129-5p过表达的MDA-MB-231或降表达的MCF7乳腺癌细胞系,通过MTT和平板克隆形成实验评价miR-129-5p表达水平对乳腺癌细胞增殖能力的影响;通过流式细胞术评价miR-129-5p表达水平对乳腺癌细胞凋亡的影响。通过Transwell实验评价miR-129-5p表达水平对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。4.通过TGF-β1作用正常乳腺上皮细胞MCF10A后,通过RT-q PCR技术检测miR-129-5p表达水平的变化,显微镜观察细胞形态学变化,Western Blot方法检测上皮间质转化（Epithelial to Mesenchymal Transition,EMT）相关标志物表达的变化。5.通过RT-q PCR和Western Blot方法检测miR-129-5p表达水平对乳腺癌细胞EMT标志物及EMT相关转录因子表达水平的影响;免疫荧光染色法观察miR-129-5p表达水平对EMT标志物的改变。6.软件预测miR-129-5p的靶基因。双荧光素酶报告系统验证miR-129-5p与靶基因的关系;通过RT-q PCR和Western Blot技术检测miR-129-5p表达对其靶基因表达水平的影响。7.在miR-129-5p降表达的乳腺癌细胞系中干扰靶基因的表达后,通过MTT、平板克隆形成实验、Transwell和流式细胞术评价miR-129-5p是否通过调控靶基因表达影响乳腺癌细胞生物学行为。研究结果:1.与正常腺体组织相比,乳腺癌组织中的miR-129-5p表达水平下降。2.miR-129-5p低表达的乳腺癌患者具有更晚的临床分期、更高的组织学分级、更多的淋巴结转移和更高的PR阳性率;miR-129-5p的低表达的乳腺癌患者5年DFS和OS明显低于高表达者;miR-129-5p表达水平是乳腺癌复发转移的独立预后因素。3.miR-129-5p在乳腺癌细胞系中表达下降;miR-129-5p过表达能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,诱导乳腺癌细胞凋亡。4.TGF-β1作用后,MCF10A细胞中miR-129-5p表达量下降。5.miR-129-5p过表达抑制乳腺癌细胞EMT标志物及相关转录因子的表达水平。6.Twist1和CBX4是miR-129-5p的靶基因。7.miR-129-5p通过靶向作用Twist1和CBX4抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。研究结论:miR-129-5p在乳腺癌中表达量下调,其表达水平与乳腺癌恶性程度和预后不良密切相关,miR-129-5p是乳腺复发转移的预后预测因素。miR-129-5p通过靶向作用Twist1和CBX4抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。本研究的结果为寻找乳腺癌新的治疗靶点提供了理论依据。
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