研究背景和目的伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma,BL）是一种起源于B细胞的高度侵袭性肿瘤[1],有三种临床亚型:非洲地方性或流行性、散发性以及免疫缺陷相关性。具有独特的临床特征、病理学特点、分子细胞遗传学特征、免疫学和流行病学特征。强烈联合化疗是治疗的主要方法,儿童BL治疗方案较为成熟,成人治疗方案大多由儿童BL治疗方案衍生而来;然而,对于部分患者来说,各种化疗方案都不甚理想,肿瘤的耐药性、复发性以及化疗的副作用仍是目前面临的最大挑战。因此,进一步探讨BL的发病机制,寻找新的治疗靶点,为制定新的治疗方案提供理论依据成为必然。miR-525是由19号染色体编码的miRNA,其中包含miR-525-5p、miR-525-3p。miR-525-5p是一个近年来逐渐被认识的miRNA分子,通过与下游相对应的靶基因结合能够调控肿瘤的发生发展。本课题组通过使用miRNA靶点分析软件Target Scan、miRDB、microcosm、Walk3.0预测分析了miR-525-5p的靶基因,结果显示,miR-525-5p能够与MyD88基因的3’-UTR结合,MyD88是一种重要的衔接蛋白,它可以激活核因子-κB（NF-κB）信号通路,介导炎性反应,在促肿瘤方面发挥着十分重要的作用。有关miR-525-5p如何影响MyD88进而发挥一系列作用尚未知晓,值得深入研究。为更进一步了解miR-525-5p的作用,探讨miR-525-5p对BL细胞株的生物学行为的影响,分析miR-525-5p与MyD88之间的调控机制,本课题组提出假说“下调的miR-525-5p靶向作用于MyD88进而活化NF-κB信号通路可能是促进Burkitt淋巴瘤发生发展的机制之一”,检测BL中miR-525-5p miRNA和MyD88蛋白的表达水平、分析miR-525-5p对BL细胞生物学行为的影响、探讨miR-525-5p对MyD88及NF-κB信号通路的调控作用、验证MyD88是否为miR-525-5p的下游靶基因,进一步揭示miR-525-5p通过MyD88/NF-κB信号通路调控BL细胞生物学行为的机制。研究方法提取石蜡包埋BL组织中RNA,采用Realtime RCR技术对miR-525-5p m RNA的表达进行检测;应用免疫组织化学染色检测MyD88的蛋白表达。利用慢病毒转染技术建立稳定过表达miR-525-5p的BL Raji、Ramos细胞株,借助于Realtime RCR技术检测miR-525-5p的转染效率,同时检测MyD88 m RNA的表达水平。构建稳定过表达miR-525-5p的细胞株,通过CCΚ-8法检测细胞增殖能力变化;应用Western Blot法对MyD88及NF-κB信号通路蛋白（p65、p-p65、IκBα、p-IκBα）的表达变化进行观察;应用软琼脂克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行检测;采用Transwell法检测细胞迁移能力;通过流式细胞术了解细胞凋亡比例变化和细胞周期分布;应用流式细胞术分析在使用化疗药物的情况下,细胞凋亡比例发生的变化。最后采用双荧光素酶实验分析MyD88是否为miR-525-5p的靶基因。研究结果BL中miR-525-5p表达下调,MyD88表达增高。过表达的miR-525-5p可以下调MyD88的表达,并抑制NF-κB信号通路;过表达的miR-525-5p能够使Raji、Ramos细胞在化疗药物上有更高的敏感性,还能使细胞的增殖、迁移、克隆形成过程受到抑制,促进细胞的凋亡,改变细胞周期。同时验证MyD88是miR-525-5p的下游靶基因。研究结论1.miR-525-5p可以靶向结合MyD88并调控其转录。2.下调的miR-525-5p可通过MyD88活化NF-κB信号通路。3.miR-525-5p通过MyD88/NF-κB信号通路调控BL细胞的增殖、克隆形成、迁移能力,促进BL细胞的凋亡,改变BL细胞的周期,增加BL细胞对化疗药物的敏感性。