论文部分内容阅读
目的：对多发性硬化(multiple sclerosis，MS)动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)发病过程中血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)和血脊髓屏障(blood-spinal cord barrier，BSCB)通透性的变化进行研究，并选取通透性变化最大时间点，通过对正常对照组、EAE模型组、法舒地尔(fasudil)干预组BBB和BSCB通透性的检测，对三组Rock2蛋白和基因水平的测定以及Rock2活性的测定，分析EAE模型中血管内皮通透性的变化规律，RhoGTP酶途径是否与此变化相关，Rho激酶抑制剂fasudil能否改善血管内皮通透性，并使EAE临床症状减轻，从而为多发性硬化的治疗提供新的思路。
方法：用豚鼠全脊髓匀浆外周免疫Lewis大鼠建立EAE动物模型，选取免疫当天、免疫7天，免疫10天、发病当天、发病3天五个时间点，通过荧光分光光度法检测小脑和脊髓腰膨大伊文斯蓝(Evans Blue，EB)漏出量，通过Westernblot检测小脑和脊髓腰膨大紧密连接蛋白Occludin含量，明确EAE病程中血脑屏障和血脊髓屏障通透性的变化规律；监测正常对照组、EAE模型组、fasudil干预组动物的临床表现，对其进行临床功能评分；并选取EAE病程中通透性变化最大时间点，通过测量EB漏出量、紧密连接蛋白Occludin含量对BBB和BSCB通透性进行定量检测；留取发病三天小脑、脊髓腰膨大，分别进行HE染色、髓鞘染色，观察病理变化；通过免疫组化、Westernblot和Realtime RT-PCR对Rock2进行蛋白和基因水平的检测，并通过Westernblot对P-mlc蛋白水平的检测确定Rock2活性。
结果：EAE模型小脑和脊髓腰膨大EB漏出量随EAE病程推移而增加，在发病当天达高峰，发病3天略有下降，Occludin在小脑和脊髓腰膨大含量随EAE病程推移而减少，在发病当天含量最少，发病3天略有升高；正常对照组、EAE模型组、fasudil干预组三组对比，EAE模型组发病时间最早，发病高峰期临床功能评分最高(P<0.01)，病理学改变最重；EAE模型组小脑和脊髓腰膨大EB漏出量最大，Occludin含量最少；EAE模型组Rock2无论通过免疫组化、Westernblot、还是Realtime RT-PCR检测在小脑和脊髓腰膨大含量均最高(P<0.01)，EAE模型组小脑和脊髓腰膨大通过Westernblot检测的P-mlc含量最高(P<0.05)。
结论：血脑屏障和血脊髓屏障通透性随EAE病程进展逐渐增加，高峰发生在EAE模型发病时，随后降低；Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)可以保护中枢神经系统屏障，改善EAE临床症状。这也许会成为有效治疗多发性硬化的一个目标。